(十四),探针的种类和优缺点

本题考查探针的种类相关知识。解题思路是依据常见的探针分类，分别阐述各类探针的制备方法及特点。

1. cDNA探针：
   • 首先，以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下进行逆转录反应，根据逆转录的原理，其反应式为：$mRNA + 4dNTP \xrightarrow{逆转录酶} cDNA + PPi$ ，从而获得cDNA。
   • 接着，将得到的cDNA克隆到合适的克隆载体中，构建重组质粒。
   • 然后，通过转化等方法将重组质粒导入宿主细胞，利用宿主细胞的扩增能力使重组质粒大量扩增。
   • 最后，提取质粒并进行分离纯化，得到的cDNA就可作为探针使用。它是目前应用最为广泛的一种探针。
2. 基因组探针：
   • 从基因组文库里筛选得到一个特定的基因或基因片段的克隆。
   • 对筛选得到的克隆进行大量扩增。
   • 扩增后进行纯化处理。
   • 用合适的限制性内切酶切取插入片段，再对切取的片段进行分离纯化，得到的片段即为探针。
3. 寡核苷酸探针：
   • 根据已知的核酸顺序，采用DNA合成仪，按照碱基互补配对原则，将一个个脱氧核苷酸依次连接起来，合成一定长度的寡核苷酸片段，该片段就可作为探针。
4. RNA探针：
   • 采用基因克隆的方法，将目的基因克隆到合适的载体上。
   • 然后通过体外转录的方法，以克隆的基因模板，在RNA聚合酶的作用下合成RNA或反义RNA，其反应式为：$DNA模板 + 4NTP \xrightarrow{RNA聚合酶} RNA + PPi$ ，得到的RNA或反义RNA可作为探针。