88.2004年3月15日前后,阜阳当地电视台连续7天报道了当地大量婴幼儿食用劣质奶粉后变成“大头娃娃”的消息，这种奶粉由于蛋白质含量严重不足，根本不能满足婴儿的生长需要，被称为“空壳奶粉”。其之所以能通过验收，是因为其中加入如三聚氰胺等物质,说明当年所用蛋白定量方法为()A. 紫外分光光度法B. 节三酮法C. 凯氏定氮法

本题考查蛋白质定量方法的原理及特点，解题思路是分析每个选项所代表的蛋白质定量方法的原理，判断哪种方法会受到三聚氰胺的干扰，从而得出当年所用的蛋白定量方法。

选项A：紫外分光光度法

• 原理：蛋白质中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸，它们具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰在280nm波长处。通过测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度，可根据朗伯 - 比尔定律$A = \varepsilon cl$（其中$A$为吸光度，$\varepsilon$为摩尔吸光系数，$c$为溶液浓度，$l$为光程）来计算蛋白质的含量。
• 分析：该方法是基于蛋白质中特定氨基酸的紫外吸收特性，而三聚氰胺不具有在280nm处的紫外吸收特性，所以不会干扰紫外分光光度法测定蛋白质含量。

选项B：茚三酮法

• 原理：茚三酮在弱酸性溶液中与α - 氨基酸共热，引起氨基酸氧化脱氨、脱羧反应，最后茚三酮与反应产物——氨和还原茚三酮发生作用，生成蓝紫色物质。通过测定该蓝紫色物质在570nm处的吸光度，可计算出氨基酸的含量，进而推算蛋白质含量。
• 分析：此方法是针对氨基酸与茚三酮的反应，三聚氰胺不与茚三酮发生类似反应，不会干扰茚三酮法测定蛋白质含量。

选项C：凯氏定氮法

• 原理：蛋白质是含氮的有机化合物，通过测定样品中的含氮量，再乘以相应的换算系数（一般为6.25），即可计算出蛋白质的含量。其基本步骤包括消化、蒸馏、吸收和滴定。在消化过程中，样品中的有机氮转化为铵盐，然后通过蒸馏将铵盐转化为氨气，用硼酸吸收氨气，最后用标准酸滴定硼酸吸收液，根据消耗的标准酸的量计算出含氮量。
• 分析：三聚氰胺中含有大量的氮元素，其含氮量高达66%左右。当在奶粉中加入三聚氰胺后，会使样品中的含氮量显著增加，从而导致用凯氏定氮法测定的蛋白质含量虚高，所以该方法会受到三聚氰胺的干扰。