碱性磷酸酶酶活性和米氏常数测定实验,用的底物为()。A. 苯酚B. 磷酸苯二钠C. 碱性磷酸酶D. 磷酸化的蛋白质

碱性磷酸酶（AP）的作用是催化底物中的磷酸基团水解，生成无机磷酸。在实验中，底物的选择需要满足两个关键条件：

1. 含有可被AP作用的磷酸基团；
2. 产物易于检测。

选项中，磷酸苯二钠（选项B）是AP的经典底物。它结构简单，含有磷酸基团，水解后生成的苯二酚可通过显色反应定量检测，因此被广泛用于酶活性和米氏常数的测定。

选项分析

• A. 苯酚：不含磷酸基团，无法被AP作用。
• B. 磷酸苯二钠：含磷酸基团，AP催化其水解为苯二酚和磷酸，产物易检测。
• C. 碱性磷酸酶：为酶本身，是催化剂而非底物。
• D. 磷酸化的蛋白质：结构复杂，检测产物困难，实验中不常用。

结论：磷酸苯二钠（B）是唯一符合实验要求的底物。