下列蛋白质沉淀方法中,哪种蛋白质不变性:A. 盐析B. 有机溶剂C. 重金属盐D. 生物碱试剂E. 高温

本题考查蛋白质沉淀方法以及蛋白质变性的相关知识。解题的关键在于理解各种蛋白质沉淀方法的原理，判断其是否会导致蛋白质空间结构改变，若空间结构不变则蛋白质不变性。

• A选项盐析：
  • 盐析是是向蛋白质溶液中加入大量中性盐，如硫酸铵、硫酸钠硫酸钠等。
  • 这些盐离子离子会与蛋白质分子争夺水分子，破坏蛋白质的水化膜，同时中和蛋白质分子表面的电荷，使蛋白质分子相互聚集而沉淀。
  • 但在盐析过程中，蛋白质的空间结构并没有被破坏，当除去盐后，蛋白质仍能恢复其天然构象和生物活性，所以盐析不会使蛋白质变性。
• B选项有机溶剂：
  • 有机溶剂如乙醇、丙酮等可以降低溶液的介电常数，使蛋白质分子间的静电引力增加，同时破坏蛋白质的水化膜，导致蛋白质沉淀。
  • 有机溶剂还会与蛋白质分子内的氢键等次级键，使蛋白质的空间结构发生改变，从而导致蛋白质变性。
• C选项重金属盐：
  • 重金属盐如汞盐、铅盐等可以与蛋白质分子中的巯基（-SH）、羧基（-COOH）等基团结合，使蛋白质分子的结构发生改变，破坏其空间结构，导致蛋白质变性沉淀。
• D选项生物碱试剂：
  • 生物碱试剂如三氯乙酸、苦味酸等可以与蛋白质分子中的碱性基团结合，使蛋白质分子的电荷分布发生改变，破坏其水化膜，导致蛋白质沉淀。
  • 同时，生物碱试剂也会影响蛋白质分子的空间结构，使其变性。
• E选项高温：
  • 高温会使蛋白质分子的热运动加剧，破坏蛋白质分子内的氢键、疏水键等次级键，使蛋白质的空间结构发生改变，导致蛋白质变性。