【题文】凝胶过滤法分离蛋白质时，从层析柱上先被洗脱下来的是：A. 分子量大的B. 分子量小的C. 电荷多的D. 带电荷少的

凝胶过滤法（分子筛层析）的核心原理是根据蛋白质的分子量大小进行分离。其关键在于凝胶颗粒内部的多孔结构：

1. 大分子蛋白质无法进入凝胶孔道，直接通过层析柱，最先被洗脱。
2. 小分子蛋白质会深入孔道，路径延长，流动速度慢，后被洗脱。
   电荷因素在此方法中不直接影响分离顺序，因此正确选项与分子量相关。

原理解析

凝胶过滤法通过分子筛效应分离物质：

• 分子量大的蛋白质因体积较大，无法深入凝胶孔道，随流动相快速流出层析柱。
• 分子量小的蛋白质可深入孔道，路径变长，滞留时间更长，因此后流出。

选项分析

• A. 分子量大的：正确，大分子因无法进入孔道最先洗脱。
• B. 分子量小的：错误，小分子滞留时间长，洗脱顺序靠后。
• C/D. 电荷相关：错误，凝胶过滤法主要分离依据是分子量，非电荷差异。