胆固醇的酶法测定通常采用的波长是A. 540nmB. 500nmC. 405nmD. 450nmE. 630nm

考查要点：本题主要考查学生对胆固醇酶法测定原理及检测波长的掌握情况，需要结合酶促反应的显色系统和光谱分析知识。

解题核心思路：
胆固醇的酶法测定通常使用胆固醇酯酶（CE）和胆固醇氧化酶（ChOx）的组合，将胆固醇转化为可检测的物质。反应过程中，过氧化物酶（POD）催化显色剂（如4-氯酚红）的颜色变化，最大吸收波长由显色剂的性质决定。需明确不同显色系统的特征波长，结合标准检测方法判断正确选项。

破题关键点：

1. 显色反应原理：胆固醇氧化酶作用后，显色剂的颜色变化对应特定波长。
2. 标准波长记忆：胆固醇酶法测定的标准检测波长为500nm，对应显色剂（如4-氯酚红）的吸收峰。

胆固醇的酶法测定步骤如下：

1. 酶解反应：胆固醇酯酶（CE）将胆固醇酯水解为游离胆固醇，胆固醇氧化酶（ChOx）将其氧化为胆甾-4-en-3-one，并生成过氧化氢（H₂O₂）。
2. 显色反应：过氧化物酶（POD）催化H₂O₂氧化显色剂（如4-氯酚红），溶液颜色从红色变为黄色。
3. 光谱检测：显色反应的吸光度变化在500nm处达到最大值，因此选择此波长进行比色测定。

选项分析：

• A. 540nm：常见于某些还原型物质检测（如葡萄糖氧化酶法），非胆固醇测定标准波长。
• B. 500nm：正确，对应4-氯酚红显色系统的吸收峰。
• C. 405nm：可能用于其他显色系统（如铁氰化钾法），但不符合本题要求。
• D. 450nm：常见于某些酶联免疫吸附试验（ELISA），与本题无关。
• E. 630nm：波长过长，通常不用于此类显色反应。