9.概述测定蛋白质一级结构的基本步骤。-|||-10.用电泳技术分离下列蛋白质,选择电泳缓冲液的pH。①血清清蛋白( =4.9 )与血-|||-(=6.8 ),②肌红蛋白( =7.0 )与胰凝乳蛋白酶( =9.5 )。-|||-11.若用凝胶过滤法分离血红蛋白与肌红蛋白时,哪一种蛋白质先被洗脱下来?-|||-__

步骤 1：测定蛋白质中氨基酸组成。
通过化学或酶法水解蛋白质，然后使用高效液相色谱（HPLC）或其他方法测定氨基酸的种类和数量。
步骤 2：蛋白质的N端和C端的测定。
使用化学或酶法确定蛋白质的N端和C端氨基酸，这有助于确定蛋白质的起始和终止位置。
步骤 3：应用两种或两种以上不同的水解方法将所要测定的蛋白质肽链断裂，各自得到一系列大小不同的肽段。
通过使用不同的酶或化学试剂，将蛋白质水解成不同大小的肽段，然后使用质谱（MS）等技术确定肽段的序列。
【答案】
(1)测定蛋白质中氨基酸组成。
(2)蛋白质的N端和C端的测定。
(3)应用两种或两种以上不同的水解方法将所要测定的蛋白质肽链断裂，各自得到一系列大小不同的肽段。

10. 用电泳技术分离下列蛋白质，选择电泳缓冲液的pH。
①血清清蛋白( $PI=4.9$ )与血红蛋白( $PI=6.8$ )，②肌红蛋白( $PI=7.0$ )与胰凝乳蛋白酶( $PI=9.5$ )。
解答:
【解析】
步骤 1：确定蛋白质的等电点。
蛋白质的等电点（PI）是其净电荷为零时的pH值。在电泳过程中，蛋白质会向与其等电点相反的电极移动。
步骤 2：选择电泳缓冲液的pH。
选择电泳缓冲液的pH值应远离蛋白质的等电点，以确保蛋白质在电场中有效移动。
步骤 3：计算电泳缓冲液的pH。
对于血清清蛋白和血红蛋白，选择pH值在4.9和6.8之间的缓冲液，例如pH=5.8的缓冲液。对于肌红蛋白和胰凝乳蛋白酶，选择pH值在7.0和9.5之间的缓冲液，例如pH=8.2的缓冲液。
【答案】
①pH=5.8的缓冲液。
②pH=8.2的缓冲液。

11. 若用凝胶过滤法分离血红蛋白与肌红蛋白时，哪一种蛋白质先被洗脱下来？
解答:
【解析】
步骤 1：了解凝胶过滤法的原理。
凝胶过滤法（也称为分子筛层析）是根据分子大小分离蛋白质的一种方法。较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒的孔隙，因此它们首先被洗脱下来。
步骤 2：比较血红蛋白和肌红蛋白的分子大小。
血红蛋白的分子量约为64,000道尔顿，而肌红蛋白的分子量约为16,000道尔顿。因此，血红蛋白的分子较大。
步骤 3：确定先被洗脱的蛋白质。
由于血红蛋白的分子较大，它将首先被洗脱下来。