下列哪个指标能证明在大肠杆菌中成功表达了外源酶蛋白质( )A. 核酸杂交证明蛋白质表达B. 在蓝白筛选中菌落呈现蓝色C. rm RT-PCR能扩增外源基因D. 纯化目的蛋白质具有酶活性

本题考查大肠杆菌中外源蛋白质表达的检测方法。关键点在于区分不同实验技术的作用：

• 核酸杂交用于检测DNA或RNA，无法直接证明蛋白质表达；
• 蓝白筛选用于判断外源基因是否插入载体，与表达无关；
• RT-PCR检测mRNA，仅能说明基因转录，未涉及翻译；
• 酶活性检测直接证明蛋白质存在且功能正常，是表达成功的最终证据。

选项分析

A. 核酸杂交证明蛋白质表达

错误。核酸杂交技术（如Southern blot、Northern blot）用于检测DNA或RNA的存在，无法直接证明蛋白质是否翻译或具有活性。

B. 蓝白筛选中菌落呈蓝色

错误。蓝白筛选通过检测lacZ基因的完整性判断外源基因是否插入：蓝色表示未插入（基因完整），白色表示插入。此步骤仅验证基因插入，与表达无关。

C. RT-PCR扩增外源基因

错误。RT-PCR通过mRNA反转录为cDNA，再扩增目标基因，说明基因转录为mRNA。但转录≠翻译，无法证明蛋白质成功表达。

D. 纯化蛋白质具有酶活性

正确。若纯化的蛋白质具有预期的酶活性，说明：

1. 蛋白质成功翻译（存在目标蛋白）；
2. 蛋白质正确折叠（具有生物学功能）。
   这是表达成功的直接证据。