题目
离子交换色谱法分离蛋白质的主要依据是蛋白质的:A. 分子量B. 等电点C. 疏水性D. 结构特异性
离子交换色谱法分离蛋白质的主要依据是蛋白质的:
A. 分子量
B. 等电点
C. 疏水性
D. 结构特异性
题目解答
答案
B. 等电点
解析
离子交换色谱法的核心原理是利用蛋白质所带电荷的差异进行分离。蛋白质在不同pH条件下会呈现不同的电荷状态:当溶液pH高于蛋白质等电点时,蛋白质带负电;反之则带正电。分离的关键在于蛋白质与离子交换树脂的结合强度,而结合强度直接由蛋白质的电荷量决定。因此,本题的考查要点是理解离子交换色谱法的分离机制与蛋白质等电点的关系。
离子交换色谱法的基本步骤如下:
- 树脂选择:根据目标蛋白质的电荷类型选择带相反电荷的树脂(如带负电的DEAE树脂用于分离带正电的蛋白质)。
- 样品加载:将蛋白质混合物加入色谱柱,蛋白质因电荷与树脂结合,而未结合的物质被洗脱。
- 洗脱过程:通过逐渐增加洗脱液的盐浓度,盐离子与蛋白质竞争结合树脂,电荷较弱的蛋白质优先被洗脱,电荷较强的则后洗脱。
- 分离依据:蛋白质的等电点决定了其在特定pH下的电荷状态。等电点差异越大,蛋白质间的电荷差异越大,分离效果越明显。