HRP与底物TMB反应后的测定波长为（ ）。A. 278nmB. 450nmC. 403nmD. 495nmE. 492nm

本题考查酶联免疫吸附试验（ELISA）中HRP-底物TMB显色反应的检测波长。关键点在于：

1. HRP（辣根过氧化物酶）催化底物TMB显色后生成蓝色产物，加入终止液（如硫酸）后变为黄色。
2. 测定波长需匹配产物的吸收峰。TMB显色反应的最终产物在酸性条件下最大吸收峰位于450nm附近，因此检测波长通常选择450nm。

核心知识点回顾

• TMB显色反应：HRP催化TMB与H₂O₂反应生成蓝色的联苯醌衍生物，加入终止液（如2M H₂SO₄）后，产物变为黄色。
• 光吸收特性：黄色产物在可见光区的吸收峰最大值为450nm，邻近波长（如490nm）有时用于背景扣除。

选项分析

• A. 278nm：属于蛋白质紫外吸收范围，与显色反应无关。
• B. 450nm：正确，对应产物最大吸收峰。
• C. 403nm：可能干扰项，但非主要检测波长。
• D. 495nm、E. 492nm：邻近波长，常用于二次检测或背景校正，非主要测定波长。