题目
利用DNAase I的水解活性和大肠杆菌DNA聚合酶I的多种酶促活性将标记的dNTP掺入新合成DNA链中,形成均匀标记的DNA探针,这种标记方法的名字是()A. 随机引物法B. 末端标记法C. 凝胶过滤层析法D. 选择性沉淀法E. 切口平移法
利用DNAase I的水解活性和大肠杆菌DNA聚合酶I的多种酶促活性将标记的dNTP掺入新合成DNA链中,形成均匀标记的DNA探针,这种标记方法的名字是()
A. 随机引物法
B. 末端标记法
C. 凝胶过滤层析法
D. 选择性沉淀法
E. 切口平移法
题目解答
答案
E. 切口平移法
解析
本题主要考察DNA探针标记方法的原理及名称对应。需结合DNAase I和大肠杆菌DNA聚合酶I的酶促活性理解各选项标记方法的差异:
关键知识点分析
题目描述的标记过程核心是:DNAase I在DNA双链上随机切割产生单链切口,随后大肠杆菌DNA聚合酶I利用其5'→3'外切酶活性切除切口处的5'端核苷酸,同时通过5'→3'聚合酶活性将标记的dNTP掺入新合成的DNA链中,实现“切口平移”(切口位置沿DNA链移动),最终形成均匀标记的探针。
选项逐一排除
- A. 随机引物法:通过随机寡核苷酸引物引导DNA聚合酶合成新链,标记集中在新合成区域,非“均匀标记”,且不涉及DNAase I切割,排除。
- B. 末端标记法:仅在DNA链的5'或3'末端添加标记物,不涉及内部均匀标记,排除。
- C. 凝胶过滤层析法:是分离纯化DNA的方法,非标记技术,排除。
- D. 选择性沉淀法:用于分离DNA与其他物质,与标记无关,排除。
- E. 切口平移法:完全匹配题目描述的酶促反应过程(DNAase I切切口+DNA聚合酶I切除旧链、掺入新链),形成均匀标记,正确。