24.PCR反应过程中,退火温度通常比引物的Tm值 A. 低5℃ B. 低15℃ C. 高5℃ D. 高15℃ E. 相等

PCR反应中的退火温度设置是关键步骤之一，直接影响引物与模板的结合效率和特异性。引物的Tm值是引物双链解链一半时的温度，而退火温度通常略低于Tm值。这是因为：

1. 特异性需求：温度过低会导致非特异性结合，过高则可能降低结合效率。
2. 平衡结合与解链：退火温度需足够低以促进引物与模板配对，但又不能过低以免影响后续延伸步骤。

核心思路：退火温度一般比引物Tm值低5℃，在保证特异性的前提下优化扩增效果。

关键知识点

• 退火温度的作用：使引物与模板DNA的互补序列结合。
• Tm值的意义：引物双链解链的温度，反映引物的稳定性。
• 温度关系：退火温度低于Tm值，但需根据实验条件（如离子强度）调整。

选项分析

• A. 低5℃：正确。退火温度通常比Tm值低5℃，确保引物特异性结合。
• B. 低15℃：过低，可能导致非特异性结合。
• C. 高5℃：过高，引物难以有效结合模板。
• D. 高15℃：极端错误，引物无法解链。
• E. 相等：直接使用Tm值会导致结合效率下降。