题目
有关重组DNA的克隆筛选步骤顺序,下列哪一项是正确的?()①重组DNA转入宿主细胞②目的DNA的获取③目的DNA与载体的重组④载体的准备和选择⑤重组体的筛选与鉴定A. ③④②①⑤B. ②④③①⑤C. ①⑤④②③D. ③④①⑤②
有关重组DNA的克隆筛选步骤顺序,下列哪一项是正确的?()
①重组DNA转入宿主细胞
②目的DNA的获取
③目的DNA与载体的重组
④载体的准备和选择
⑤重组体的筛选与鉴定
- A. ③④②①⑤
- B. ②④③①⑤
- C. ①⑤④②③
- D. ③④①⑤②
题目解答
答案
B
解析
本题考查重组DNA的克隆筛选步骤顺序,解题思路是按照重组DNA技术的一般流程,依次分析每个步骤的先后顺序。
详细步骤分析
- 目的DNA的获取(②):这是整个重组DNA技术的起始步骤。首先需要从生物体中分离、提取出我们所需要的目的DNA片段,它是后续操作的基础。
- 载体的准备和选择(④):在获取目的DNA后,需要选择合适的载体,如质粒、噬菌体等。载体需要具备能够在宿主细胞中自主复制、有多个限制酶切点以便插入目的DNA、有标记基因便于筛选等特点。准备好载体后,才能进行后续的连接操作。
- 目的DNA与载体的重组(③):使用同一种限制酶分别切割目的DNA和载体,使它们产生相同的黏性末端或平末端,然后在DNA连接酶的作用下,将目的DNA片段连接到载体上,形成重组DNA分子。
- 重组DNA转入宿主细胞(①):将重组DNA分子导入到合适的宿主细胞中,如大肠杆菌等。常用的导入方法有转化、转染等。只有将重组DNA导入宿主细胞,才能利用宿主细胞的代谢系统进行复制和表达。
- 重组体的筛选与鉴定(⑤):由于导入宿主细胞的可能有未重组的载体、自身环化的目的DNA以及重组DNA等多种情况,所以需要对含有重组DNA的宿主细胞进行筛选和鉴定,以确定哪些细胞中含有我们所需要的重组DNA。
综上所述,正确的顺序是②④③①⑤。