第二章 基因工程制药名词:1基因工程技术:就是将所要重组对象的目的基因插入、拼接、转入新的宿主细胞,构建成工程菌(或细胞),实现遗传物质的重新组合,并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。2分批培养:一次性将培养基加入反应器中,接种培养后收获细胞的操作方式。3补料分批培养:是将种子介入发酵罐中进行培养,经过一段时间后,间歇或连续地补加新鲜培养基,使菌体进一步生长的培养方法。4连续培养:是将种子接入发酵反应器中,搅拌培养至菌体浓度达一定程度后,开动进料和出料蠕动泵,以一定稀释率进行不间断培养。5高密度发酵:是指培养液中菌体的浓度在50gDCW/L以上,目的是降低成本,提高效率。6离子交换层析:是依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。7疏水层析:是利用蛋白质表面的疏水区域和固定相上疏水基团之间相互作用力差异,对蛋白组分进行分离的层析方法。8亲和层析:是利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附,这种结合既是特异的,又是可逆的,改变条件可以是结合解除。9:凝胶过滤层析:是以多孔性凝胶填料为固定相,按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相层析方法。简答题:1利用基因工程技术生产药物的优点

答 : 大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽,为临床使用提供有效的保障;

可以提供足够数量的生理活性物质,以便对其生理、生化、和结构进行深入研究,从而扩大这些物质的应用范围;

可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质;

内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处,可以通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除;

可获得新型化合物,扩大药物筛选来源。

2基因工程药物制造的主要程序有哪些?

答:获得目的基因,组建重组质粒,构建基因工程菌(或细胞),培养工程菌,产物分离纯化,除菌过滤,半成品检定,成品检定,包装。

3人工合成目的基因的限制有哪些?

答:不能合成太长的基因;人工合成基因时,遗传密码的简并性会为选择密码子带来很大困难,当以氨基酸顺序推测核苷酸序列时,不一定与天然基因完全一致,易造成中性突变;费用较高。

4基因工程宿主菌应满足哪些要求?

答:具有高浓度、高产量、高产率;能利用易得廉价原料;不致病、不产生内毒素;发热量低、需氧低,适当的发酵温度和细胞形态;容易进行代谢调控;容易进行重组DNA技术;产物容易提取纯化。

5基因工程中的表达载体必须具备哪些条件?

答:载体能独立地复制;

应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记,以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选;

应具有很强的启动子,能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别;

应具有阻遏子,使启动子受到控制,只有当诱导时才能进行转录;

应具有很强的终止子,以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因,而不转录其他无关的的基因,同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳定。

6影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些?

答:外源基因的剂量,外源基因的表达效率,表达产物的稳定性,细胞的代谢负荷,工程菌的培养条件。

7真核基因在大肠杆菌中的表达形式有哪些?

答:以融合蛋白的形式表达药物基因;以非融合蛋白的形式表达药物基因;分泌型表达药物基因。

8表达用酵母菌株应满足哪些要求?

答:菌体生长力要强;菌体内源蛋白酶要较弱;菌株性能要稳定;分泌能力要强。