结果分析 质控线一般会在3—5分钟内出现。最长的反应时间为20分钟，在这段时间里最好将试纸条从样品提取液中取出。如果质控线没有出现，那么本次检测失败。 测试线显现，说明样品为阳性。 测试线不显现，说明样品为阴性。 测试线的颜色变化与质控线的颜色变化一样，都是由红变紫。 检测试纸条需保存于4度低温条件，如在野外条件艰苦，尽量避免暴露在高温下。IF PE □ 000-|||-PRUS 正-|||-闻 IF PE □ 000-|||-PRUS 正-|||-闻  购买试纸 北京博欧实德生物技术有限公司地址：北京朝阳区北苑路奥运媒体村天畅园1号楼C1-2006室[100107]  ________________注：本片所述试纸仅能够检测含有Cry1Ab/1Ac转基因成分的转基因水稻，转基因大豆种子检测纸条须另外购买，详情可咨询北京博欧实德生物技术有限公司。附：快速检测试纸条法在大豆转基因检测中的应用来源：上海农业网转基因食品的安全问题，特别是转基因食品对人及动物的健康，以及对生态环境的影响，一直是人们关注的焦点。2008年中国从美洲进口3000多万吨转基因大豆，出口欧美等国家40多万吨非转基因大豆，2009年一季度我国大豆的进出口量呈递增趋势，为加强大豆产品的食品安全管理，需要检验机构对其进行有效监控。国内外转基因检测主要有三种方法，第一种是以核酸为基础的PCR检测方法，包括定性PCR、实时荧光定量PCR、PCR-ELISA半定量和基因芯片等方法；第二种是检测外源基因的表达产物一蛋白质检测方法，分为试纸条、ELISA和蛋白芯片三种方法；第三种是利用红外检测转基因产品化学及空间结构。以核酸为基础的PCR检测方法，是目前国内外检测生物技术产品最常用的方法，PCR方法具有准确、检测限低、适用范围广的特点，但需要的仪器设备昂贵，检测周期较长，因此需要一种快速检测方法来充实，满足大豆产品在种植、加工及贸易中的监控需要。目前，快速检测试纸条法能较好地对大豆产品进行检测，且检测结果准确、速度快、成本低，适合快速检测的需要。快速检测试纸条法应用了双抗体夹心法，首先将CP4 EPSPS蛋白特异的抗体，偶连于显色试剂，并参入试纸条。当试纸条被插入含有CP4 EPSPS蛋白的植物组织的小量萃取物时，偶连抗体与蛋白之间就发生了结合，与偶连于显色试剂上的某些但不是全部抗体形成夹心物。膜片含有两个捕获区，一个捕获区可捕获结合的CP4 EPSPS蛋白，另一个捕获区可捕获显色试剂。当夹心物和未反应的显色试剂被膜片上的特定区捕获时，这些捕获区就显现出红色。若膜片上仅存在一条红色对照线，便说明受检样品为阴性样品，若存在两条线，便说明受检样品为阳性样品。文章采用快速检测试纸条法与PCR方法，分别检测阴性大豆、不同国家阳性大豆、不同转基因含量的阳性大豆，比较两种方法检测结果的一致性，并对快速检测试纸条检测限进行评定，分析快速检测试纸条在大豆转基因检测中应用的可能性。1材料与方法1.1材料及试剂东北大豆；美国进口大豆；巴西进口大豆；阿根廷进口大豆；无水乙醇：分析纯，市售；快速检测试纸条：美国SDI公司；量筒：100 mL’分度值1mL;锥形瓶：250 mL;一次性样品管：1.5 mL;一次性移液吸管：0.5 mL; GB/T19495.4- 2004《转基因产品检测核酸定性PCR检测方法》中所用材料与试剂。1.2仪器天平：Mettler Toledo PB1502 - S/A，感量0.01 g，瑞士；实验磨：备有筛孔孔径为2.0mm的筛网，上海嘉定；PCR仪：PCR System 9700，美国；电泳仪：A- gageln mini，美国；凝胶成像仪：Uvitec，美国。1.3测定方法1.3.1 PCR法按GB/T19495.4 - 2004执行。1.3.2快速检测试纸条法(1)用实验磨将样品粉碎至90%以上通过2.0 mm筛网，称取约30 9试样于250mL锥形瓶中，加水100 mL，剧烈震荡20s，静置20 s。(2)用一次性移液吸管吸取提取液0.5mL于一次性样品管中。(3)将一条转基因快速检测试纸条插入样品管提取液中，静置5 min。(4)试纸条上结果窗上出现一条红线证明为阴性大豆，出现两条红线为阳性大豆。2结果与讨论2.1两种方法测定阴性大豆的结果比较用PGR法及快速检测试纸条法对东北大豆进行转基因测试，结果见表1。结果表明，两种方法对阴性大豆进行转基因检测，可以取得相同的结果。2.2两种方法测定阳性大豆的结果比较用PCR法及快速检测试纸条法对进口大豆进行转基因测试，结果见表2~表4。结果表明，两种方法对美国、巴西、阿根廷大豆进行转基因检测，结果均为阳性，可以取得相同的结果。2.3不同转基因含量大豆的结果比较将进口阳性大豆与国产阴性大豆按不同质量比进行混合，用快速检测试纸条法测定转基因含量，结果见表5。结果表明，不同转基因含量的阳性大豆，用快速检测试纸条法进行检测，可以取得阳性检测结果，方法判定准确。2.4检测限的确定取转基因大豆与非转基因大豆按质量百分比进行混合，确定其检出限，结果表明快速检测试纸条法检出限可以达到0.1%。3结论采用快速检测试纸条法测定大豆转基因含量，测定时间仅需10 min，测定结果准确，与传统PCR方法相比，缩短了工作时间，提高了工作效率，节约了检测成本，检测材料对环境没有污染，可以推广使用。丁耀魁，沈娟，马黎黎（中国华粮物流集团北良有限公司，辽宁大连116001）粮油食品科技2010.2江洪涛采集审核；程彬彬编辑上传。 关键字：转基因快速检测