分、切、接、转、筛是基因工程常用的5个步骤，其中哪一步用到分子杂交技术的?A. 第一步B. 第二步C. 第三步D. 第四步E. 第五步

考查要点：本题主要考查基因工程五个基本步骤中各步骤的核心操作及所用技术，特别是分子杂交技术的应用场景。

解题关键：

1. 明确基因工程五步骤：分（获取目的基因）、切（用限制酶切割）、接（基因连接）、转（导入受体细胞）、筛（筛选含目的基因的受体细胞）。
2. 分子杂交技术的作用：通过DNA探针检测目的基因是否成功导入受体细胞或是否表达。
3. 筛选步骤的必要性：在第五步中，需通过分子杂交技术验证目的基因的存在，从而筛选出阳性克隆。

核心思路：分子杂交技术用于检测目的基因的存在，而这一检测过程发生在筛选阶段，因此对应第五步。

基因工程的五个步骤依次为：

1. 获取目的基因（分）：通过PCR、反转录或直接分离等方法获得目的基因。
2. 切割质粒与目的基因（切）：用同种限制酶切割质粒和目的基因，产生相同黏性末端。
3. 基因重组（接）：将目的基因插入质粒切口，形成重组质粒。
4. 导入受体细胞（转）：通过转化、转染或感染等方式将重组质粒送入受体细胞。
5. 筛选阳性细胞（筛）：通过选择培养基或分子杂交技术，筛选出成功导入目的基因的受体细胞。

分子杂交技术的核心是使用标记的DNA探针（与目的基因互补），与受体细胞的DNA或mRNA杂交，检测目的基因的存在。此操作发生在第五步筛选中，用于确认目的基因是否成功整合到受体细胞的基因组中。