二代测序建库包含以下哪些步骤？A. 片段化B. 末端补齐C. 加接头D. PCR富集E. DNA产物回收

二代测序建库是高通量测序的关键步骤，主要目的是将DNA样本制备成适合测序仪检测的文库。本题考查对建库流程中核心步骤的掌握。解题关键在于理解每个步骤的作用，并判断其是否属于标准流程。需注意，建库过程通常包括片段化、末端处理、接头连接、文库扩增及纯化等环节。

选项分析

A. 片段化

DNA分子过长，需通过物理或化学方法切成小片段，便于后续处理和测序，是建库第一步。

B. 末端补齐

片段化后可能产生粘性末端，需修复成平末端并添加碱基（如A尾），确保接头连接效率。

C. 加接头

连接特异性接头（adapters），使DNA片段能固定在测序芯片上，是文库构建的核心步骤。

D. PCR富集

通过PCR扩增有效文库分子，增加浓度，确保测序时信号足够强。

E. DNA产物回收

通过纯化去除酶、dNTP等杂质，避免干扰后续步骤，保证文库质量。

结论：所有选项均为二代测序建库的标准步骤。