题目
以下哪种物质是Illumina测序中聚合反应的原料() A. dNTPB. 可逆终止荧光dNTPC. 荧光dNTPD. ddNTP
以下哪种物质是Illumina测序中聚合反应的原料()
- A. dNTP
- B. 可逆终止荧光dNTP
- C. 荧光dNTP
- D. ddNTP
题目解答
答案
B
解析
考查要点:本题主要考查对Illumina测序技术中聚合反应原料的了解,需明确其核心原理与关键试剂的特性。
解题思路:
- 关键知识点:Illumina测序采用可逆终止法,通过荧光标记的可逆终止dNTP实现逐轮碱基检测与链延伸。
- 区分选项:需理解普通dNTP(A)、荧光dNTP(C)、ddNTP(D)与可逆终止荧光dNTP(B)的区别,特别是可逆终止基团的作用。
破题关键:
- 可逆终止基团使链延伸在每轮仅添加一个碱基,便于检测后去除终止基团继续后续循环。
- 荧光标记用于实时记录碱基掺入信息。
Illumina测序的核心步骤是循环测序反应,其聚合反应原料为可逆终止荧光dNTP(选项B)。具体分析如下:
- 选项A(dNTP):普通dNTP无荧光标记和终止基团,无法实现单碱基分辨率检测,排除。
- 选项C(荧光dNTP):仅有荧光标记,但缺乏可逆终止基团,无法终止链延伸,导致无法逐轮检测,排除。
- 选项D(ddNTP):ddNTP是不可逆终止剂(缺3'羟基),链一旦掺入即永久终止延伸,无法循环使用,排除。
- 选项B(可逆终止荧光dNTP):
- 荧光标记:用于检测碱基类型。
- 可逆终止基团:暂时阻断延伸,检测后通过化学反应去除,使链可继续延伸。
- 符合Illumina测序“边合成边测序”的技术要求。