13. (4.0分) 下列哪种PCR方法采用两种不同浓度的引物。()A. 反向PCRB. 多重PCRC. 不对称PCRD. LP-PCR

本题考查对不同PCR技术特点的理解，核心在于识别哪种方法通过调整引物浓度差异实现特定扩增目标。关键点在于：

1. 不对称PCR的核心是使用两种不同浓度的引物，使其中一种引物过量，导致产物偏向单链DNA。
2. 其他选项中，反向PCR和长片段PCR的引物浓度常规配比，多重PCR可能涉及多对引物但非两种浓度。

选项分析

A. 反向PCR

用于扩增已知序列两侧的未知片段，需通过反向设计引物并环化处理，但引物浓度仍保持常规配比，与题干条件无关。

B. 多重PCR

在同一反应中扩增多个目标片段，需多对引物，但每对引物浓度需根据扩增效率独立优化，而非仅使用两种不同浓度的引物。

C. 不对称PCR

关键方法：通过显著降低其中一种引物的浓度，使反应后期该引物耗尽，生成单链DNA。此过程明确依赖两种不同浓度的引物，符合题干要求。

D. LP-PCR

即长片段PCR，需优化酶和缓冲体系以扩增长片段，但引物浓度配比与常规PCR一致，无特殊调整。