题目
简述 PCR 技术的基本原理和过程。
简述 PCR 技术的基本原理和过程。
题目解答
答案
2. PCR 技术的基本原理：以目的 DNA 分子为模板，以一对与模板互补的寡核苷酸片段为引物，在 DNA 聚合酶作用下，按照碱基互补配对原则，从 5 ’ → 3 ’ 方向延伸新链，直至完成两条新链的合成。重复这一过程，即可使目的片段得到指数倍扩增。组成 PCR 反应体系的基本成分包括模板 DNA 、特异引物、耐热性 DNA 聚合酶、 dNTP 、含有 Mg 2+ 的缓冲液以及 H 2 O 。 PCR 技术的基本过程：由变性、退火、延伸三部分组成。 1 ）变性：将反应体系加热至 95 ℃，使模板 DNA 完全变性成为单链，同时引物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消除。 2 ）退火：将温度下降至适宜温度，使引物与模板 DNA 结合。 3 ）延伸：通常将温度升至 72 ℃， DNA 聚合酶以 dNTP 为底物催化 DNA 的合成反应。上述 3 个步骤称为 1 个循环，新合成的 DNA 分子作为下一轮合成的模板继续进行扩增，通常这个过程重复 20~30 个循环即可达到大量目的 DNA 片段。
解析
PCR 技术的基本原理是利用 DNA 聚合酶在体外进行 DNA 复制，通过变性、退火和延伸三个步骤，使特定的 DNA 片段得到指数倍扩增。PCR 反应体系包括模板 DNA、特异引物、耐热性 DNA 聚合酶、dNTP、含有 Mg2+ 的缓冲液以及 H2O。PCR 过程中，模板 DNA 在高温下变性成为单链，引物与模板 DNA 结合，DNA 聚合酶催化 DNA 的合成反应，新合成的 DNA 分子作为下一轮合成的模板继续进行扩增，通常这个过程重复 20~30 个循环即可达到大量目的 DNA 片段。