题目
智慧职教: 简述革兰氏染色法的操作步骤并说明革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌的染色结果,分析染色结果不同的原因。
智慧职教: 简述革兰氏染色法的操作步骤并说明革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌的染色结果,分析染色结果不同的原因。
题目解答
答案
1、革兰氏染色的操作步骤:①涂片 ②干燥 ③固定 ④结晶紫初染1分钟 ⑤碘液媒染1分钟 ⑥95%乙醇脱色20-30s ⑦沙黄复染1分钟 ⑧晾干镜检2、革兰氏阳性细菌染色结果为蓝紫色,革兰氏阴性细菌的染色结果为红色3、染色结果不同的原因: 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌染色结果不同的主要原因是:细胞壁的结构组成有差异,结晶紫初染时,两类菌体都被染成了蓝紫色,碘液媒染时,形成结晶紫-碘复合物,增强染色剂与细菌的结合力。当用乙醇脱色时,革兰氏阳性菌细胞壁的肽聚糖层数多且厚,交联紧密,结晶紫复合物在短时间内不易被洗脱而保留在细胞内,经脱色和复染后仍保留初染色剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌由于其肽聚糖层数少,薄且交联度低,脂类含量高,乙醇脱色时,脂类被乙醇溶解,细胞壁通透性增加,结晶紫-碘的复合物在短时间容易被洗脱出来呈无色,用复染剂染色后,被染成复染剂的红色。
解析
步骤 1:涂片
将细菌样本均匀涂布在载玻片上,形成薄而均匀的菌膜。
步骤 2:干燥
将涂有细菌的载玻片在空气中自然干燥,或用酒精灯火焰轻轻加热干燥。
步骤 3:固定
将干燥后的载玻片用酒精灯火焰加热固定,使细菌附着在载玻片上。
步骤 4:结晶紫初染
用结晶紫染液对载玻片进行染色,染色时间约为1分钟。
步骤 5:碘液媒染
用碘液对载玻片进行媒染,媒染时间约为1分钟,使结晶紫与碘形成复合物。
步骤 6:乙醇脱色
用95%乙醇对载玻片进行脱色,脱色时间约为20-30秒,革兰氏阳性菌保留蓝紫色,革兰氏阴性菌被脱色。
步骤 7:沙黄复染
用沙黄染液对载玻片进行复染,复染时间约为1分钟,使革兰氏阴性菌染成红色。
步骤 8:晾干镜检
将染色后的载玻片晾干后,用显微镜观察染色结果。
将细菌样本均匀涂布在载玻片上,形成薄而均匀的菌膜。
步骤 2:干燥
将涂有细菌的载玻片在空气中自然干燥,或用酒精灯火焰轻轻加热干燥。
步骤 3:固定
将干燥后的载玻片用酒精灯火焰加热固定,使细菌附着在载玻片上。
步骤 4:结晶紫初染
用结晶紫染液对载玻片进行染色,染色时间约为1分钟。
步骤 5:碘液媒染
用碘液对载玻片进行媒染,媒染时间约为1分钟,使结晶紫与碘形成复合物。
步骤 6:乙醇脱色
用95%乙醇对载玻片进行脱色,脱色时间约为20-30秒,革兰氏阳性菌保留蓝紫色,革兰氏阴性菌被脱色。
步骤 7:沙黄复染
用沙黄染液对载玻片进行复染,复染时间约为1分钟,使革兰氏阴性菌染成红色。
步骤 8:晾干镜检
将染色后的载玻片晾干后,用显微镜观察染色结果。