测定蛋白质浓度的方法主要有 [填空(1)] 、 [填空(2)] 、 [填空(3)] 和 [填空(4)] 。A. 双缩脲法B. Folin-酚试剂法C. 紫外吸收法D. 凯氏定氮法

本题考查蛋白质浓度测定的常用方法。解题核心在于准确记忆四种经典方法的名称及其对应原理。需注意区分不同方法的关键特征：

• 双缩脲法基于肽键与铜离子显色反应；
• Folin-酚试剂法通过蛋白质与酚试剂的还原反应显色；
• 紫外吸收法利用芳香族氨基酸的光吸收特性；
• 凯氏定氮法通过测定氮含量间接计算蛋白质浓度。

方法解析

1. 双缩脲法（A）
   蛋白质在碱性环境下与铜离子反应生成紫色络合物，颜色深浅与蛋白质浓度相关。操作简便，但灵敏度较低。

2. Folin-酚试剂法（B）
   蛋白质的酪氨酸、色氨酸等残基在碱性条件下可将Folin-酚试剂还原，生成蓝色产物。灵敏度高，适合微量蛋白测定。

3. 紫外吸收法（C）
   蛋白质中酪氨酸、色氨酸的芳香环在280nm波长处有特征性吸收，吸光度与浓度成正比。快速无破坏，但易受杂质干扰。

4. 凯氏定氮法（D）
   通过硫酸消化破坏蛋白质，释放氮元素并定量测定。结果精确，但需破坏样品，耗时较长。

易错点提示

• Lowry法虽是经典方法，但未在选项中，需注意题目限定；
• 凯氏定氮法是间接方法，需通过氮蛋白系数换算。