题目
简答题判断核酸样品的纯度,DNA纯品的OD260/OD280应为1.8,RNA纯品的OD260/OD280应为()。
题目解答
答案
解析
考查要点:本题主要考查学生对核酸纯度检测方法中光密度比值(OD260/OD280)的理解,特别是不同核酸类型(DNA与RNA)的纯度判断标准。
解题核心思路:
- 光密度比值的意义:OD260用于检测核酸(DNA/RNA)含量,OD280用于检测蛋白质含量。通过两者的比值可判断样品中是否混有蛋白质。
- 纯核酸的比值特征:
- DNA纯品:OD260/OD280 ≈ 1.8(排除蛋白质污染)。
- RNA纯品:OD260/OD280 ≈ 2.0(RNA结构特性导致比值更高)。
- 关键结论:RNA的比值高于DNA,因RNA分子中蛋白质干扰更少,且结构特性使260nm吸收相对更强。
RNA纯品的OD260/OD280比值为2.0的原因:
- 核酸与蛋白质的吸收特性:
- 核酸(DNA/RNA)在260nm处有特征吸收,蛋白质在280nm处有特征吸收。
- 纯RNA中蛋白质含量极低,OD280主要反映RNA自身的微弱吸收(如共轭双键结构)。
- 比值差异的来源:
- RNA分子中核糖的结构和尿嘧啶的分布,使其在260nm处的吸收相对于280nm更显著。
- 若比值显著偏离2.0,可能表明存在蛋白质(比值下降)或化学污染物(比值异常升高)。
结论:纯RNA的OD260/OD280比值应为2.0,这是判断RNA纯度的重要指标。