生物样品蛋白质测定的参考方法是A. 凯氏定氮法B. 双缩脲法C. 酚试剂法D. 紫外分光光度法E. 邻苯三酚红钼法

本题考查生物样品蛋白质测定的参考方法。关键点在于区分不同蛋白质测定方法的特点和适用范围：

• 凯氏定氮法是经典参考方法，通过测定氮含量推算蛋白质含量，准确但步骤繁琐。
• 双缩脲法、酚试剂法等比色法快速，但易受干扰，属于常规方法。
• 紫外分光光度法适用于纯蛋白，不适合复杂样品。
• 邻苯三酚红钼法可能用于特定场景，但非标准参考方法。

方法对比分析

1. 凯氏定氮法

   • 原理：通过硫酸消化破坏有机物，释放蛋白质中的氮，转化为氨气，用硼酸吸收后滴定计算氮含量。
   • 特点：结果准确，被AOAC等机构认定为参考方法，但操作复杂、耗时长。
   • 适用性：标准参考方法，尤其适用于复杂生物样品。

2. 双缩脲法/酚试剂法

   • 原理：肽键与Cu²⁺反应生成颜色物质，通过比色定量。
   • 特点：操作简便快速，但易受干扰（如还原糖、脂类等），结果偏差较大。
   • 适用性：常规实验室快速检测，非参考方法。

3. 紫外分光光度法

   • 原理：蛋白质在280nm处有特征吸收峰。
   • 特点：快速，但要求蛋白质纯度高，干扰因素多。
   • 适用性：纯蛋白溶液检测，不适用于生物样品。

4. 邻苯三酚红钼法

   • 原理：蛋白质与钼酸盐反应生成蓝色复合物。
   • 特点：灵敏度较高，但特异性不足，干扰较多。
   • 适用性：特定场景下的总蛋白测定，非标准方法。

结论

凯氏定氮法因准确性高、被权威机构认可，成为生物样品蛋白质测定的参考方法。