题目
以下哪种技术常用于循环核酸(circRNA)的检测和定量A. Western blotB. 质谱分析C. 荧光定量PCR(qPCR)D. Northern blot
以下哪种技术常用于循环核酸(circRNA)的检测和定量
A. Western blot
B. 质谱分析
C. 荧光定量PCR(qPCR)
D. Northern blot
题目解答
答案
C. 荧光定量PCR(qPCR)
解析
本题考查循环核酸(circRNA)检测和定量的常用技术。关键点在于理解各选项技术的核心用途及适用场景:
- circRNA是环状RNA,无poly-A尾,需通过特异性序列检测;
- qPCR通过设计特异性引物扩增目标序列,灵敏度高、定量准确,是检测circRNA的常用方法;
- Northern blot虽可检测RNA,但灵敏度较低,操作复杂;
- Western blot和质谱分析主要针对蛋白质,与RNA检测无关。
选项分析
A. Western blot
- 用途:检测特定蛋白质,需抗体结合目标蛋白。
- 局限:不直接用于RNA检测,排除。
B. 质谱分析
- 用途:分析蛋白质或多肽的组成和结构。
- 局限:无法直接定量特定RNA分子,排除。
C. 荧光定量PCR(qPCR)
- 原理:通过荧光信号实时监测cDNA扩增过程,定量初始模板。
- 优势:
- 特异性:需设计与circRNA序列匹配的引物,避免非特异性扩增;
- 灵敏度高:可检测极低浓度的circRNA;
- 定量准确:通过标准曲线计算目标RNA的绝对或相对含量。
- 适用性:circRNA无poly-A尾,但qPCR直接扩增cDNA,不受此限制,最符合题意。
D. Northern blot
- 原理:通过RNA电泳分离和探针杂交检测特定RNA。
- 局限:
- 灵敏度低于qPCR;
- 操作繁琐,耗时长;
- 仅能定性或半定量,定量精度低。