在使用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时,需要注意哪些因素以保证结果的准确性?A. 蛋白质样品的浓度B. 考马斯亮蓝的浓度--C. 反应时间D. 所有以上因素

考马斯亮蓝法是一种通过蛋白质与染料结合后吸光度变化来定量蛋白质的方法。其准确性依赖于反应条件的严格控制。本题考查对实验关键影响因素的理解，需明确各选项如何影响测定结果。

核心思路：

1. 蛋白质浓度需在标准曲线线性范围内，避免非线性误差。
2. 染料浓度必须足够与蛋白质完全结合，形成稳定复合物。
3. 反应时间需一致，确保复合物充分形成且避免降解。
   关键点：所有因素相互关联，缺一不可。

选项分析

A. 蛋白质样品的浓度

若样品浓度过高，超出染料结合能力，导致非线性关系；过低则信号不足。需稀释至标准曲线线性范围。

B. 考马斯亮蓝的浓度

染料浓度过低时，蛋白质无法完全结合，吸光度偏低；过高可能引入背景干扰。需严格配制标准浓度。

C. 反应时间

反应时间不足，复合物未形成完全；过长可能因染料自聚或光解导致吸光度漂移。需固定反应时间（通常30分钟）。

D. 所有以上因素

三个因素共同作用，任意一个失控均会导致结果偏差。因此必须同时控制。