为了防止载体自身环化,可以用下列那种基因工程酶[ ]A. 单一限制性内切酶B. DNA聚合酶C. 碱性磷酸酶D. 核苷酸激酶

考查要点：本题主要考查基因工程中载体处理的相关知识，特别是防止载体自身环化的关键酶及其作用原理。

解题核心思路：
载体在被限制性内切酶切割后会产生黏性末端，若不处理，两端可能重新连接形成环状载体，导致无法插入目的基因。碱性磷酸酶通过去除末端的磷酸基团，破坏连接酶的作用位点，从而有效防止自连。

破题关键点：

1. 载体自身环化的原因：切割后黏性末端的磷酸基团与另一末端的羟基结合。
2. 关键酶的作用：碱性磷酸酶去除磷酸基团，阻断自我连接；核苷酸激酶则用于添加磷酸基团（常用于目的基因处理）。

选项分析

A. 单一限制性内切酶

• 作用：切割DNA产生黏性末端。
• 问题：切割后的黏性末端若未处理，易自连形成环状载体，无法达到防止自连的目的。

B. DNA聚合酶

• 作用：填补平末端或修复DNA链。
• 无关性：本题需处理黏性末端，而非填补或修复，故不相关。

C. 碱性磷酸酶

• 关键作用：去除DNA末端的磷酸基团，破坏连接酶的催化条件，使载体无法自行连接成环。
• 正确性：直接解决自连问题，是正确答案。

D. 核苷酸激酶

• 作用：向末端添加磷酸基团（如在T载体系统中）。
• 反向操作：若载体已去磷酸，需用激酶处理目的基因末端，而非载体本身。