题目
【单选题】PCR反应过程中,退火温度通常比引物的Tm值A. 低5℃ B. 低15℃ C. 高5℃ D. 高15℃ E. 相等
【单选题】PCR反应过程中,退火温度通常比引物的Tm值
A. 低5℃ B. 低15℃ C. 高5℃ D. 高15℃ E. 相等
题目解答
答案
低5℃
解析
PCR反应中的退火温度设置是关键步骤之一,直接影响引物与模板的结合效率。本题考查对退火温度与引物Tm值关系的理解。
核心思路:退火温度需略低于引物的Tm值,以确保引物能有效退火,同时避免非特异性结合。
关键点:
- Tm值是引物双链解链一半时的温度,退火温度过低会导致非特异性结合,过高则引物无法有效退火。
- 常规设定:退火温度通常比引物Tm值低5℃,平衡特异性和效率。
PCR反应中,退火温度的设定需根据引物的Tm值调整:
- 引物Tm值:引物的熔解温度,反映其双链解链的温度。
- 退火温度的作用:使引物与模板DNA结合。
- 温度关系:
- 若退火温度等于或高于Tm值,引物难以有效退火。
- 若过低(如低15℃),可能增加非特异性结合风险。
- 低5℃是常用设定,既能保证引物与模板特异性结合,又避免非特异性扩增。