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【题文】目前全球肆虐的病毒是一种以前尚未在人类中发现的新型冠状病毒,命名为2019-nCoV(以下简称nCoV)。它具有已知RNA病毒中最大的基因组,单链RNA大小为3万个碱基左右。结构如下图。Wh-|||-翻-|||-曰墨S s-|||-sh-|||-VN 小-|||-曰墨N-|||-曰墨W-|||-oueaquiow (N) uporoad pricdeooopnN q(1)病毒分离下列从组织细胞中分离病毒的方法描述正确的是_________A.可用光学显微镜观察病毒表面的冠状蛋白结构B.可用电子显微镜观察病毒表面的冠状蛋白结构C.需要用超高速离心的方法分离冠状病毒颗粒D.需要用富含营养的液体培养基大量繁殖病毒(2)病毒核酸测序由于RNA相比DNA稳定性差很多,往往将病毒样本的RNA反转录成cDNA,扩增之后进行分段测序。在该过程中,需要用到的酶有_________A.RNA 聚合酶B.DNA 聚合酶C.DNA 连接酶D.逆转录酶E.解旋酶假设其中某长度40个碱基的测序片段的分段测序结果具有片段:①-TCTTACAACCAGAACTAATTA-,②-CAGTGTTAATCTTA-,③-ACAACCAGAACTAATTA-,④-ACTAATTACCCCCTGCAT-;那么该段序列最可能为以下的_____。A.-TCTTACAACCAGAACTAATTAGACTAATTACCCCCTGCAT-B.-CAGTGTTAATCTTACAACCAGAACTAATTACCCCCTGCAT-C.-TCTTACAACCAGAACTAATTACAGTGTTAATCTTAACAAC-D.-CAGTGTTAATCTTACAACCAGAACTAATTATTACCCCCTG-(3)序列功能分析通过对病毒的遗传序列分析,发现 nCoV 的表面刺突蛋白(图中S 蛋白)的氨基酸序列与2003 年爆发的SARS 冠状病毒的S蛋白具有76.47%的相似性。SARS病毒的宿主细胞表面都具有一种膜蛋白——血管紧张素转换酶2(ACE2)。多年前,为了确定“SARS病毒能与ACE2识别侵入细胞”,研究人员用其宿主细胞VeroE6细胞(非洲绿猴肾细胞)进行了如下研究,其中能支持这一结论的下列研究有__________ A.ACE2 能有效地与SARS病毒的S蛋白的某一区结合B.可溶性的ACE2能阻断 S 蛋白与VeroE6细胞的结合C.针对ACE2的抗体能减弱 SARS 病毒在VeroE6细胞中增殖D.S 蛋白某些区域氨基酸突变后导致与ACE2 结合的能力降低结合以上研究成果,已知ACE2在小肠、肺、肾脏等组织中表达量较高,与血压调节和炎症反应有关。由此可推测____________ A.nCoV 是由SARS 冠状病毒逐渐进化而来B.nCoV可能主要通过消化道和呼吸道感染C.nCoV的人际间传染能力比SARS 病毒强D.nCoV的S蛋白也可能与ACE2蛋白识别nCoV序列中具有RNA聚合酶基因,无逆转录酶基因。以下推测合理的有_____ A.nCoV的复制遗传物质的方式和HIV相同B.RNA 聚合酶参与该病毒遗传物质的复制和转录C.RNA 聚合酶参与该病毒翻译蛋白质的过程D.RNA 聚合酶介导病毒入侵人体宿主细胞nCoV序列基因中编码的膜蛋白质(图中M蛋白)具有内质网定位序列,是在粗面内质网上翻译的,以下推测合理的有_____ A. nCoV 出细胞的过程与细胞核膜有关B. nCoV 出细胞的过程与与内质网膜有关C. nCoV 出细胞的过程与与溶酶体膜有关D. nCoV 出细胞的过程与与高尔基体膜有关(4)病毒检测病毒的检测方法有:①RNA检测,即检测病毒的遗传物质RNA;②特异性抗原蛋白检测,即检测病毒表面的一种糖蛋白;③特异性抗体检测,即检测感染者体内通过免疫反应所产生的某种抗体。RNA检测过程中为了增加目标分子水平,往往进行RT-PCR,即包含反转录和 PCR 两个过程。下列对RT-PCR过程描述正确的是_____A.需要针对 nCoV 的特异性基因设计一种双链 DNA引物B.该过程需要 dNTP 作为原料,无需核糖核苷酸做为原料C.PCR 需要经过95℃变性,72℃复性和55℃延伸等过程D.该过程PCR的模板实际上是反转录得到的cDNA对这三种检测方案所描述正确的是__________ A.某人有可能①②为阳性③为阴性,也可能③为阳性①②为阴性B.方法②③都需要用到抗原-抗体杂交的方法C.在感染后的1-2 天内就可以用方法③检测血液中的抗体D.方法①②需要从患者体内采集病毒样本,而方法③不用(5)病毒治疗饶子和院士团队成功解析了nCoV的RNA聚合酶的三维空间结构,并提出药物 Remdesivir(瑞德西韦)是通过代谢产物影响 RNA 聚合酶发挥药效的假说。在体外实验中,科学家需要用不同剂量的 Remdesivir 处理病毒侵染的VeroE6细胞。对该实验表述不正确的是_____A.培养细胞时通常需要在培养液中添加血清、血浆等一些天然成分B.培养过程中温度控制在37℃,置于95%O2和5%CO2混合气体的培养箱中C.添加5%CO2 的作用是维持细胞生长过程中呼吸代谢的产物持续产生D.该实验需要添加对照用以确定 Remdesivir 对人体是否会产生副作用有专家建议利用病毒轻症感染者治疗康复期间的血清制成药剂治疗危重患者,你对此的评价是_____ A.如果成功,其中的有效成分可能来自于轻症患者的浆细胞B.如果成功,危重症患者康复后体内也可能产生抗病毒抗体C.如果有副作用,可能来自细胞免疫介导的免疫排斥反应D.如果有副作用,可能来自体液免疫介导的过敏反应(6)疫苗预防针对该病毒现在还没有具有针对性的特效药,因此各国都寄希望于研制出针对该病毒的疫苗。疫苗分为以下5种:灭活疫苗,减毒活疫苗,重组蛋白疫苗,核酸疫苗,重组病毒载体疫苗。重组蛋白疫苗:中科院微生物所动物试验阶段可以让大肠杆菌表达出 nCoV的S 蛋白,打进人体,让免疫系统针对该蛋白产生抗体。该过程需要将 S 蛋白基因转入大肠杆菌体内,你认为对该过程描述合理的是_____A.用PCR可以短时间获得大量的 S 蛋白基因,根据需要在基因两端加上的限制性酶切位点可以不同B.该过程的表达载体上要具有复制原点、起始密码子、终止密码子、抗生素抗性基因和S 蛋白基因C.通过Ca2+处理大肠杆菌以获得感受态细胞,该状态的细胞能够提高表达载体整合到拟核上的效率D.能够利用大肠杆菌DNA扩增出目的基因,说明成功导入了 S 蛋白基因,是否表达 S 蛋白还需要抗体检测获得的工程菌需要筛选才能投入疫苗的生产,下列于此过程有关表述正确的是____________A.筛选和鉴定菌种要在培养基中加入琼脂,大肠杆菌在伊红美蓝培养基上会出现黑色菌落B.培养基配制过程要称量、溶化、灭菌,倒平板之前调节 pH 值到适宜范围以利于细菌繁殖C.如果需要计数,则用稀释涂布平板法涂布平板之后对菌落计数,显微镜直接观察值可能偏小D.将高产 S 蛋白的菌种保存起来可以用 4℃临时保藏和-20℃甘油管藏等方法,后者保存时间长工程菌操作整个过程需要严格的无菌操作,下列无菌操作方式合理的有_____A.每次使用接种环前后都要进行灼烧灭菌,但是灼烧之后要置于菌液冷却才能使用B.液体培养基用高压蒸汽灭菌,加了琼脂的固体培养基可以用干热灭菌箱灭菌C.操作者双手应该用酒精擦拭消毒,但是该过程不能完全杀死微生物的芽孢和孢子D.倒平板凝固后要将培养皿倒置,目的是防止水分过快蒸发以及冷凝水回滴造成污染核酸疫苗:美国人体试验阶段(未做动物试验)将S蛋白对应的 mRNA用脂膜包裹打进人体,让它在细胞里表达病毒的S蛋白。以下对该方法的误解是_A.核酸注入人体细胞只会造成体细胞的遗传物质发生变化,并不影响生殖细胞B.该过程流程大大简化,节省了重组蛋白疫苗的生产 S 蛋白的时间C. mRNA 如果成功进入细胞,翻译产生的S蛋白就可以在细胞内对抗病毒D.核酸外脂膜与细胞膜融合,帮助核酸进入细胞指导S蛋白的翻译重组病毒载体疫苗:军事科学院临床 II 期阶段(动物试验和临床 I 期完成)是把 nCoV 的部分基因植入到不致病但侵染能力很强的腺病毒载体里,重组成新病毒。任何疫苗在大规模使用前,最好通过动物试验再进行临床试验。大规模试验用哺乳动物一般用小鼠,但是小鼠没有人类ACE2蛋白,因此获得大量人源ACE2 转基因小鼠成为动物疫苗试验的重要步骤。在此过程中下列表述合理的是_______A.鉴于人类基因组测序已经完成,既可以从人类基因组文库中获取目的基因,又可以从cDNA文库中获取B.鉴于小鼠也是真核生物,既可以将人类ACE2完整的基因导入小鼠体内,又可以导入无内含子的目的基因C.鉴于受体细胞是小鼠的受精卵细胞,重组DNA分子导入最好用显微注射的方法,该方法不适合原核生物细胞D.如果有转人源ACE2基因小鼠若干,要在短时间获得大量实验小鼠,可用核移植的方法克隆很多小鼠(7)最新进展:重组人源ACE2蛋白治疗新冠病毒肺炎的II 期临床实验在欧洲开始进行!依据以上材料和所学知识,请写出该药物的作用机理:_____________________。

【题文】目前全球肆虐的病毒是一种以前尚未在人类中发现的新型冠状病毒,命名为2019-nCoV(以下简称nCoV)。它具有已知RNA病毒中最大的基因组,单链RNA大小为3万个碱基左右。结构如下图。

(1)病毒分离下列从组织细胞中分离病毒的方法描述正确的是_________
A.可用光学显微镜观察病毒表面的冠状蛋白结构
B.可用电子显微镜观察病毒表面的冠状蛋白结构
C.需要用超高速离心的方法分离冠状病毒颗粒
D.需要用富含营养的液体培养基大量繁殖病毒
(2)病毒核酸测序
由于RNA相比DNA稳定性差很多,往往将病毒样本的RNA反转录成cDNA,扩增之后进行分段测序。在该过程中,需要用到的酶有_________
A.RNA 聚合酶
B.DNA 聚合酶
C.DNA 连接酶
D.逆转录酶
E.解旋酶
假设其中某长度40个碱基的测序片段的分段测序结果具有片段:①-TCTTACAACCAGAACTAATTA-,②-CAGTGTTAATCTTA-,③-ACAACCAGAACTAATTA-,④-ACTAATTACCCCCTGCAT-;那么该段序列最可能为以下的_____。
A.-TCTTACAACCAGAACTAATTAGACTAATTACCCCCTGCAT-
B.-CAGTGTTAATCTTACAACCAGAACTAATTACCCCCTGCAT-
C.-TCTTACAACCAGAACTAATTACAGTGTTAATCTTAACAAC-
D.-CAGTGTTAATCTTACAACCAGAACTAATTATTACCCCCTG-
(3)序列功能分析
通过对病毒的遗传序列分析,发现 nCoV 的表面刺突蛋白(图中S 蛋白)的氨基酸序列与2003 年爆发的SARS 冠状病毒的S蛋白具有76.47%的相似性。
SARS病毒的宿主细胞表面都具有一种膜蛋白——血管紧张素转换酶2(ACE2)。多年前,为了确定“SARS病毒能与ACE2识别侵入细胞”,研究人员用其宿主细胞VeroE6细胞(非洲绿猴肾细胞)进行了如下研究,其中能支持这一结论的下列研究有__________   
A.ACE2 能有效地与SARS病毒的S蛋白的某一区结合
B.可溶性的ACE2能阻断 S 蛋白与VeroE6细胞的结合
C.针对ACE2的抗体能减弱 SARS 病毒在VeroE6细胞中增殖
D.S 蛋白某些区域氨基酸突变后导致与ACE2 结合的能力降低
结合以上研究成果,已知ACE2在小肠、肺、肾脏等组织中表达量较高,与血压调节和炎症反应有关。由此可推测____________   
A.nCoV 是由SARS 冠状病毒逐渐进化而来
B.nCoV可能主要通过消化道和呼吸道感染
C.nCoV的人际间传染能力比SARS 病毒强
D.nCoV的S蛋白也可能与ACE2蛋白识别
nCoV序列中具有RNA聚合酶基因,无逆转录酶基因。以下推测合理的有_____ 
A.nCoV的复制遗传物质的方式和HIV相同
B.RNA 聚合酶参与该病毒遗传物质的复制和转录
C.RNA 聚合酶参与该病毒翻译蛋白质的过程
D.RNA 聚合酶介导病毒入侵人体宿主细胞
nCoV序列基因中编码的膜蛋白质(图中M蛋白)具有内质网定位序列,是在粗面内质网上翻译的,以下推测合理的有_____   
A. nCoV 出细胞的过程与细胞核膜有关
B. nCoV 出细胞的过程与与内质网膜有关
C. nCoV 出细胞的过程与与溶酶体膜有关
D. nCoV 出细胞的过程与与高尔基体膜有关
(4)病毒检测
病毒的检测方法有:①RNA检测,即检测病毒的遗传物质RNA;②特异性抗原蛋白检测,即检测病毒表面的一种糖蛋白;③特异性抗体检测,即检测感染者体内通过免疫反应所产生的某种抗体。
RNA检测过程中为了增加目标分子水平,往往进行RT-PCR,即包含反转录和 PCR 两个过程。下列对RT-PCR过程描述正确的是_____
A.需要针对 nCoV 的特异性基因设计一种双链 DNA引物
B.该过程需要 dNTP 作为原料,无需核糖核苷酸做为原料
C.PCR 需要经过95℃变性,72℃复性和55℃延伸等过程
D.该过程PCR的模板实际上是反转录得到的cDNA
对这三种检测方案所描述正确的是__________   
A.某人有可能①②为阳性③为阴性,也可能③为阳性①②为阴性
B.方法②③都需要用到抗原-抗体杂交的方法
C.在感染后的1-2 天内就可以用方法③检测血液中的抗体
D.方法①②需要从患者体内采集病毒样本,而方法③不用
(5)病毒治疗
饶子和院士团队成功解析了nCoV的RNA聚合酶的三维空间结构,并提出药物 Remdesivir(瑞德西韦)是通过代谢产物影响 RNA 聚合酶发挥药效的假说。在体外实验中,科学家需要用不同剂量的 Remdesivir 处理病毒侵染的VeroE6细胞。对该实验表述不正确的是_____
A.培养细胞时通常需要在培养液中添加血清、血浆等一些天然成分
B.培养过程中温度控制在37℃,置于95%O2和5%CO2混合气体的培养箱中
C.添加5%CO2 的作用是维持细胞生长过程中呼吸代谢的产物持续产生
D.该实验需要添加对照用以确定 Remdesivir 对人体是否会产生副作用
有专家建议利用病毒轻症感染者治疗康复期间的血清制成药剂治疗危重患者,你对此的评价是_____ 
A.如果成功,其中的有效成分可能来自于轻症患者的浆细胞
B.如果成功,危重症患者康复后体内也可能产生抗病毒抗体
C.如果有副作用,可能来自细胞免疫介导的免疫排斥反应
D.如果有副作用,可能来自体液免疫介导的过敏反应
(6)疫苗预防
针对该病毒现在还没有具有针对性的特效药,因此各国都寄希望于研制出针对该病毒的疫苗。疫苗分为以下5种:灭活疫苗,减毒活疫苗,重组蛋白疫苗,核酸疫苗,重组病毒载体疫苗。
重组蛋白疫苗:中科院微生物所动物试验阶段
可以让大肠杆菌表达出 nCoV的S 蛋白,打进人体,让免疫系统针对该蛋白产生抗体。该过程需要将 S 蛋白基因转入大肠杆菌体内,你认为对该过程描述合理的是_____
A.用PCR可以短时间获得大量的 S 蛋白基因,根据需要在基因两端加上的限制性酶切位点可以不同
B.该过程的表达载体上要具有复制原点、起始密码子、终止密码子、抗生素抗性基因和S 蛋白基因
C.通过Ca2+处理大肠杆菌以获得感受态细胞,该状态的细胞能够提高表达载体整合到拟核上的效率
D.能够利用大肠杆菌DNA扩增出目的基因,说明成功导入了 S 蛋白基因,是否表达 S 蛋白还需要抗体检测
获得的工程菌需要筛选才能投入疫苗的生产,下列于此过程有关表述正确的是____________
A.筛选和鉴定菌种要在培养基中加入琼脂,大肠杆菌在伊红美蓝培养基上会出现黑色菌落
B.培养基配制过程要称量、溶化、灭菌,倒平板之前调节  pH 值到适宜范围以利于细菌繁殖
C.如果需要计数,则用稀释涂布平板法涂布平板之后对菌落计数,显微镜直接观察值可能偏小
D.将高产 S 蛋白的菌种保存起来可以用 4℃临时保藏和-20℃甘油管藏等方法,后者保存时间长
工程菌操作整个过程需要严格的无菌操作,下列无菌操作方式合理的有_____
A.每次使用接种环前后都要进行灼烧灭菌,但是灼烧之后要置于菌液冷却才能使用
B.液体培养基用高压蒸汽灭菌,加了琼脂的固体培养基可以用干热灭菌箱灭菌
C.操作者双手应该用酒精擦拭消毒,但是该过程不能完全杀死微生物的芽孢和孢子
D.倒平板凝固后要将培养皿倒置,目的是防止水分过快蒸发以及冷凝水回滴造成污染
核酸疫苗:美国人体试验阶段(未做动物试验)
将S蛋白对应的 mRNA用脂膜包裹打进人体,让它在细胞里表达病毒的S蛋白。以下对该方法的误解是_
A.核酸注入人体细胞只会造成体细胞的遗传物质发生变化,并不影响生殖细胞
B.该过程流程大大简化,节省了重组蛋白疫苗的生产 S 蛋白的时间
C. mRNA 如果成功进入细胞,翻译产生的S蛋白就可以在细胞内对抗病毒
D.核酸外脂膜与细胞膜融合,帮助核酸进入细胞指导S蛋白的翻译
重组病毒载体疫苗:军事科学院临床 II 期阶段(动物试验和临床 I 期完成)
是把  nCoV 的部分基因植入到不致病但侵染能力很强的腺病毒载体里,重组成新病毒。任何疫苗在大规模使用前,最好通过动物试验再进行临床试验。大规模试验用哺乳动物一般用小鼠,但是小鼠没有人类ACE2蛋白,因此获得大量人源ACE2 转基因小鼠成为动物疫苗试验的重要步骤。在此过程中下列表述合理的是_______
A.鉴于人类基因组测序已经完成,既可以从人类基因组文库中获取目的基因,又可以从cDNA文库中获取
B.鉴于小鼠也是真核生物,既可以将人类ACE2完整的基因导入小鼠体内,又可以导入无内含子的目的基因
C.鉴于受体细胞是小鼠的受精卵细胞,重组DNA分子导入最好用显微注射的方法,该方法不适合原核生物细胞
D.如果有转人源ACE2基因小鼠若干,要在短时间获得大量实验小鼠,可用核移植的方法克隆很多小鼠
(7)最新进展:
重组人源ACE2蛋白治疗新冠病毒肺炎的II 期临床实验在欧洲开始进行!依据以上材料和所学知识,请写出该药物的作用机理:_____________________。

题目解答

答案

【答案】BC    BD    B    ABCD    ABCD    B    BD    BD    ABCD    BC    ABCD    ACD    ACD    CD    AC    ACD   使用大量的ACE2蛋白,封闭住新冠病毒上的S蛋白,让它迷失方向,找不到真正能被感染的细胞,从而显著降低了新冠病毒对Vero E6细胞的粘附和感染。

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