题目
要想通过细菌大量获得一个基因的表达蛋白质,需要完成以下哪些步骤?A. 通过PCR或RT-PCR获得目的基因B. 构建重组原核表达质粒C. 获得含有重组原核表达质粒的菌株D. 诱导表达E. 纯化表达蛋白F. 测蛋白质的空间结构
要想通过细菌大量获得一个基因的表达蛋白质,需要完成以下哪些步骤?
A. 通过PCR或RT-PCR获得目的基因
B. 构建重组原核表达质粒
C. 获得含有重组原核表达质粒的菌株
D. 诱导表达
E. 纯化表达蛋白
F. 测蛋白质的空间结构
题目解答
答案
ABCDE
A. 通过PCR或RT-PCR获得目的基因
B. 构建重组原核表达质粒
C. 获得含有重组原核表达质粒的菌株
D. 诱导表达
E. 纯化表达蛋白
A. 通过PCR或RT-PCR获得目的基因
B. 构建重组原核表达质粒
C. 获得含有重组原核表达质粒的菌株
D. 诱导表达
E. 纯化表达蛋白
解析
本题考查基因工程中利用细菌表达蛋白质的完整流程。关键点在于理解每个步骤在实际操作中的必要性:
- 目的基因获取(PCR/RT-PCR)是基础;
- 构建表达载体(重组原核表达质粒)是表达的前提;
- 转化并筛选菌株确保宿主含有重组质粒;
- 诱导表达启动基因转录翻译;
- 纯化蛋白获得最终产物。
测空间结构(F)属于后续研究,非生产必需。
选项分析
A. PCR/RT-PCR获取目的基因
必要。所有操作始于目的基因,必须通过扩增获得。
B. 构建重组原核表达质粒
必要。需将目的基因插入表达载体,确保细菌能识别并表达。
C. 获得重组质粒的菌株
必要。通过转化、筛选得到含重组质粒的宿主菌。
D. 诱导表达
必要。原核表达载体通常依赖诱导剂(如IPTG)启动基因表达。
E. 纯化蛋白
必要。最终从菌体中分离、纯化目标蛋白。
F. 测蛋白质空间结构
非必要。题目仅要求“获得蛋白质”,结构分析可省略。