下列哪一项可用于显著提高扩增产物的灵敏度和特异性? ( )A. 巢式PCRB. 降落PCRC. 竞争引物PCRD. 不对称PCRE. 锚定PCRF. 反向PCR

本题考查的是不同类型PCR技术的特点和应用，解题思路是分别分析每个选项中PCR技术的原理和作用，判断其是否能显著提高扩增产物的灵敏度和特异性。

• A. 巢式PCR：
  • 原理：巢式PCR是使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。
  • 作用：由于巢式引物是在第一次扩增产物内部进行扩增，大大减少了非特异性扩增的可能性，从而提高了扩增的特异性。同时，即使第一次扩增的模板量很少，第二次扩增也能基于第一次的产物进行有效扩增，提高了检测的灵敏度。所以巢式PCR可显著提高扩增产物的灵敏度和特异性。
• B. 降落PCR：
  • 原理：降落PCR是在PCR反应中，起始退火温度较高，然后在每个循环中逐渐降低退火温度。
  • 作用：其主要目的是在开始时利用较高的退火温度保证引物与模板的特异性结合，随着循环进行降低退火温度以增加扩增效率，但它对灵敏度的提高效果不明显，主要侧重于提高特异性，不能像巢式PCR那样显著提高灵敏度和特异性。
• C. 竞争引物PCR：
  • 原理：竞争引物PCR是利用一对竞争引物，其中一个引物的5'端带有一个能被核酸外切酶Ⅲ（ExoⅢ）识别并切割的位点，另一个引物为正常引物。在PCR反应中，带有ExoⅢ识别位点的引物与模板结合后，ExoⅢ会从其3'端开始切割，使引物从模板上脱落，从而影响扩增效率。
  • 作用：主要用于定量分析，而不是提高扩增产物的灵敏度和特异性。
• D. 不对称PCR：
  • 原理：不对称PCR是在PCR反应体系中，使用不同浓度的引物，一般其中一个引物的浓度是另一个引物的50 - 100倍。
  • 作用：主要用于产生单链DNA，用于测序等，对提高扩增产物的灵敏度和特异性没有显著作用。
• E. 锚定PCR：
  • 原理：锚定PCR是在未知序列的一端加上一段已知序列，然后利用已知序列设计引物进行PCR扩增。
  • 作用：主要用于扩增未知序列，对于提高灵敏度和特异性的效果不显著。
• F. 反向PCR：
  • 原理：反向PCR是用反向的引物来扩增两引物以外的未知序列。
  • 作用：主要用于扩增已知序列两侧的未知序列，不能显著提高扩增产物的灵敏度和特异性。