重组子的筛选方法有A. 抗药性筛选B. α-互补C. 酶切分析D. 核酸分子杂交E. PCR

本题考查重组子筛选方法的掌握情况。重组子筛选是基因工程中的关键步骤，需结合不同方法判断外源基因是否正确插入载体。核心思路是理解每种方法的原理及应用场景：

• 抗药性筛选通过载体标记基因（如抗性基因）的表型直接筛选；
• α-互补利用载体携带的报告基因（如lacZ'）检测插入；
• 酶切分析通过限制性内切酶切割后的电泳图谱判断插入位点；
• 核酸分子杂交用探针直接检测目的基因存在；
• PCR通过特异性引物扩增目的基因片段验证插入。

A. 抗药性筛选

载体通常携带抗性基因（如氨苄青霉素抗性基因）。若外源基因插入抗性基因，使其失活，则宿主细胞在含抗生素的培养基中无法生长；反之，成功重组的细胞可存活。此方法通过表型选择快速筛选阳性克隆。

B. α-互补

载体含不完整的lacZ'基因（编码α-肽）。外源基因插入会破坏lacZ'的阅读框，导致无法形成蓝色菌落（与X-gal和IPTG反应）。未插入的载体可形成蓝色菌落，插入的则为白色。此方法通过蓝白筛选直接判断插入。

C. 酶切分析

用特定限制酶切割重组质粒，通过凝胶电泳观察酶切片段。若外源基因插入破坏酶切位点，则电泳图谱与空载体不同。此方法通过分子水平的酶切图谱验证插入。

D. 核酸分子杂交

用标记探针（如放射性同位素标记的目的基因探针）与重组质粒杂交。若出现信号，说明目的基因存在。此方法通过分子杂交信号直接检测目的基因。

E. PCR

设计特异性引物扩增目的基因片段。若电泳检测到预期条带，说明目的基因插入成功。此方法通过扩增产物的存在验证插入。