下列测定蛋白质不是利用呈色反应的是( )A. 凯氏定氮法B. 茚三酮反应C. 双缩脲反应D. 考马斯亮蓝反应E. 酚试剂反应

考查要点：本题主要考查学生对不同蛋白质测定方法原理的理解，特别是区分哪些方法依赖于呈色反应。

解题核心思路：
需明确各选项的测定原理，判断其是否通过蛋白质与试剂直接反应产生颜色变化来定量。

• 呈色反应指蛋白质或多肽中的特定基团（如肽键）与试剂反应生成有色物质。
• 凯氏定氮法的核心是氮元素的定量，而非直接与蛋白质结构反应，因此不属于呈色反应。

破题关键点：

1. 凯氏定氮法通过氮含量推算蛋白质含量，涉及消化、蒸馏和滴定步骤，颜色变化仅用于滴定终点判断，非直接反应。
2. 其余选项（茚三酮、双缩脲、考马斯亮蓝、酚试剂）均通过蛋白质与试剂直接显色实现定量。

选项分析

A. 凯氏定氮法

• 原理：通过测定样品中氮的总量，结合蛋白质含氮量（约16%），计算蛋白质含量。
• 关键步骤：
  1. 消化：蛋白质→硫酸铵（含氮）。
  2. 蒸馏：硫酸铵→氨气→硼酸吸收为铵盐。
  3. 滴定：用盐酸滴定铵盐，通过指示剂颜色变化判断终点。
• 本质：氮元素的定量，颜色变化仅辅助滴定，非蛋白质直接显色。

B. 茚三酮反应

• 原理：蛋白质或多肽与茚三酮在酸性加热条件下生成蓝紫色化合物。
• 关键：肽键直接参与反应，产生明显颜色变化。

C. 双缩脲反应

• 原理：蛋白质中的肽键在碱性条件下与Cu²⁺形成紫色络合物。
• 关键：颜色深浅与蛋白质浓度相关。

D. 考马斯亮蓝反应

• 原理：考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成红色复合物，最大吸收峰在595 nm。
• 关键：染料与蛋白质的疏水性结合区域作用。

E. 酚试剂反应

• 原理：酚试剂（如Folin-酚试剂）与蛋白质中的酪氨酸、色氨酸残基反应，生成兰色复合物。
• 关键：酪氨酸是主要显色基团。