镰状红细胞贫血是一种比较典型的单基因遗传病。在鉴定该疾病相关基因的过程中，在免疫电泳发现异常的基础上,通过寡核苷酸探针“钓出”了致病基因a珠蛋白的cDNA,发现了a珠蛋白编码基因的变异。这种克隆疾病相关基因的方法是A. 基因组错配筛选B. 代表性差异分析C. 氨基酸序列反推D. 特异性抗体筛选E. Northern印迹鉴定

本题考查单基因遗传病相关基因克隆方法的判断，核心在于理解不同基因克隆技术的原理和应用场景。题目中关键信息是“寡核苷酸探针钓出致病基因a珠蛋白的cDNA”，需明确探针设计的依据。氨基酸序列反推法的核心是根据已知蛋白质序列推导对应DNA序列，进而设计探针筛选目标基因，与题目描述完全匹配。

方法原理分析

1. 氨基酸序列反推法：当已知目标蛋白质的正常氨基酸序列时，可推导出对应mRNA的核苷酸序列，设计特异性寡核苷酸探针，用于从cDNA文库中筛选目标基因。
2. 题目关键步骤：通过已知a珠蛋白的正常序列设计探针，钓取突变基因的cDNA，属于典型的反推法应用。

选项排除

• A. 基因组错配筛选：用于检测基因组中碱基突变，需直接比较正常/异常DNA序列。
• B. 代表性差异分析：用于比较不同组织或条件下的基因表达差异。
• D. 特异性抗体筛选：依赖抗体与目标蛋白的结合，而非探针杂交。
• E. Northern印迹鉴定：用于检测RNA表达水平，不涉及基因克隆。