由下列信息求八肽的序列。 （1）酸水解得Ala，Arg，Leu，Met，Phe，Thr，2Val。 （2） Sanger试剂处理得DNP-Ala。 （3）胰蛋白酶处理得Ala，Arg，Thr和Leu，Mel，Phe，2Val。当以Sanger试剂处理时分别得到DNP-Ala和DNP-Val。 （4）溴化氰处理得Ala，Arg，高丝氨酸内酯，Thr，2Val和Leu，Phe，当用Sunger试剂处理时，分别得到DNP-Ala和DNP-Leu。

考查要点：本题主要考查肽链序列的推断方法，涉及Sanger试剂、胰蛋白酶、溴化氰等化学试剂的作用原理，以及如何结合不同实验结果确定氨基酸序列。

解题核心思路：

1. 确定N端：Sanger试剂用于鉴定肽链的N端氨基酸。
2. 酶解分析：胰蛋白酶作用于Arg和Lys的羧基侧，通过分解产物推断切割位点。
3. 化学断裂：溴化氰作用于Met的羧基侧，生成高丝氨酸内酯，通过断裂位置推断序列。

破题关键点：

• 条件（2）直接给出N端为Ala。
• 条件（3）通过胰蛋白酶切割结果，确定Arg的位置及后续氨基酸。
• 条件（4）通过溴化氰切割结果，确定Met的位置及后续氨基酸。

条件（1）：酸水解产物

• 氨基酸组成：Ala、Arg、Leu、Met、Phe、Thr、2Val（共8个氨基酸）。

条件（2）：Sanger试剂处理

• N端氨基酸：DNP-Ala → 序列起始为Ala。

条件（3）：胰蛋白酶处理

1. 分解产物：Ala、Arg、Thr 和 Leu、Met、Phe、2Val。
2. 切割位点：胰蛋白酶作用于Arg的羧基侧，说明原序列中Arg后接Thr。
3. Sanger试剂结果：
   • 第一段（Ala-Arg-Thr）→ DNP-Ala（N端为Ala）。
   • 第二段（Val-Val-Met-Leu-Phe）→ DNP-Val（N端为Val）。

条件（4）：溴化氰处理

1. 分解产物：Ala、Arg、高丝氨酸内酯、Thr、2Val 和 Leu、Phe。
2. 切割位点：溴化氰作用于Met的羧基侧，说明原序列中Met后接Leu。
3. Sanger试剂结果：
   • 第一段（Ala-Thr-Arg-Val-Val）→ DNP-Ala（N端为Ala）。
   • 第二段（Leu-Phe）→ DNP-Leu（N端为Leu）。

综合推断

• N端→ Ala。
• Arg后接Thr（条件3）。
• Met后接Leu（条件4）。
• Val重复出现，结合切割位置，确定序列为：
  Ala-Thr-Arg-Val-Val-Met-Leu-Phe。