________是，聚丙烯酰胺凝胶能把长度只差一个核苜酸 的单链DNA分子区分开，这意味着在长10-1500个核昔酸的范围内，所有分子经电泳后可成为一系列nJ分辨的条带，单链DNA分子的序列由与之互补的 多核昔酸链的酶促合成来判定，互补链在某一特定的核昔酸位置即加入双脱 氧核甘酸的位置终止。又称Sanger （桑格）双脱氧链终止法。是Sanger于1975年发明的。测序过程需要先做一个PCR反应。PCR过程中，双脱氧核 糖核酸可能随机的被加入到正在合成中的DNA片段里。由于双脱氧核糖核酸 多脱了一个氧原子，一旦它被加入到DNA链上，这个DNA链就不能继续增加 长度。最终的结果是获得所有川•能获得的、不同长度的DNA片段。目前最普 遍最先进的方法，是将双脱氧核糖核酸进行不同荧光标记。将PCR反应获得 的总DNA通过毛细管电泳分离，跑到最末端的DNA就可以在激光的作用下发 出荧光。由于ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP （4种双脱氧核糖核酸）荧光标 记不同，计算机可以自动根据颜色判断该位置上碱基究竟是A, T, G, C中 的哪一个。8试绘图并说明大引物PCR定点诱变法的过程。答：图在P183页预先设计一个含有突变序列的引物2,第一轮以引物2和引物3扩增出短片 段DNA。待PCR产物分离纯化后除去原来的引物，将PCR扩增产物作为大引 物，并与引物1 一起再对靶基因进行第二轮扩增，其PCR产物即为突变I'KJDNA。 9.何谓基因工程的四大里程碑和三大技术发明？答：四大里程碑：明确遗传物质是DNA： DNA双螺旋结构（半保留复制及其中心法则）；遗传密码子的破译；基因转移载体的发现。 三大技术发明：工具酶的发明（内切酶、合成酯、连接酶）；基因合成和测序（合成仪、测 序仪）；PCR技术（PCR扩增仪）。：10基因重组是常用哪几种载体？其共同特点如何？答：常用载体的种类：质粒、 噬菌体衍生物（COS、M13）、动物病毒；共同特征：①自主复制②易于扩增分离 纯化③有非必需区④有单一酶切位点（多克隆位点）单一酶切位点：一种酶在一 个载体上只有一个酶切位点；多克隆位点：一个载体上的某一个区域含有多个单 一酶切位点⑤有选择标记基因⑥表达载体还应有表达调控元件（启动了、增强了、 终止子,SD序列）11作为理想的质粒载体有哪些基本条件？答：作为理想的质粒载体，应具备以下几个条件（1）能自主复制，即本身是复制 子（2）具有一种或多种限制酶的单一切割位点，并在此位点中插入外源基因片段， 不影响本身的复制功能；（3）在基因组中有1.2个筛选标记，为寄主细胞提供易于 检测的表型特征，（4）分子量要小，多拷贝，易于操作。12什么叫插入失活，举例说明之？ P104答：在含某个基因的载体中，将目的基因DNA片段插入该基因，导致该基因 的功能失活。（4分）如：有免疫功能失活的插入型载体在气基因组上有一段 免疫区，外源性DNA片段插入，会使载体CI阻止基因失活，其功能遭到破 坏，因而，凡带有外源性基因插入的重组体形成清晰的噬菌斑，而没外源性 DNA插入的亲本噬菌斑形成浑浊的噬菌斑。13如何从所克隆到的基因重组体载体中鉴定基因的存在和正确性？答：一：利用遗传标志的表型特征筛选1有载体提供的性状进行筛选：①抗生素抗性标记筛选②抗性基因的插入失活筛 选③LacZ基因失活筛选2.根据插入基因的遗传性状筛选二：利用重组了的结构特征筛选①重组了大小鉴别筛选②酶切鉴定③PCR筛选法④原位杂交⑤斑点杂交⑥Souther blot杂交。