在制备化学发光剂与抗原抗体结合物的方法中，属于间接偶联法的是（）A 碳二亚胺缩合法B 混合酸酐法C 过磷酸盐氧化法D 琥珀酰亚胺活化法E 重氮盐偶联法

本题考查化学发光剂与抗原抗体结合物的偶联方法分类，核心在于区分直接偶联法与间接偶联法的关键特征。

• 直接偶联法通常通过化学反应直接将发光剂与生物分子（如抗原、抗体）的官能团（如氨基、羟基等）反应，常见方法包括碳二亚胺缩合法、混合酸酐法等。
• 间接偶联法需借助中间载体或活化剂，通过双功能交联剂间接连接发光剂与生物分子。例如，琥珀酰亚胺活化法通过活化发光剂的羧酸基团形成活性酯，再与生物分子的氨基反应，属于间接偶联。

选项分析

1. A. 碳二亚胺缩合法
   • 直接偶联法，通过缩合剂（如EDC）促进羧酸与氨基反应，无需中间载体。
2. B. 混合酸酐法
   • 直接偶联法，利用酸酐活化羧酸，直接与氨基反应。
3. C. 过磷酸盐氧化法
   • 直接偶联法，常用于氧化酚类化合物形成醌结构，直接与生物分子结合。
4. D. 琥珀酰亚胺活化法
   • 间接偶联法，琥珀酰亚胺活化羧酸形成活性酯，通过中间体与生物分子反应。
5. E. 重氮盐偶联法
   • 直接偶联法，利用重氮盐与芳香环结构直接反应。