一、实验目的-|||-1.学习 ,5- 硝基水杨酸(DNS)法测定植物组织中还原糖含量的原理。-|||-2.掌握用 ,5- 硝基水杨酸(DNS)法测定植物组织中还原糖含量的方法。-|||-二、实验原理和课前作业-|||-1.实验原理-|||-在碱性条件下,还原糖与DNS试剂共热后,还原糖被氧化成糖酸及其他产物,DNS被还原-|||-棕红色的 -3 -氨基 -5-3 硝基水杨酸,该物质在540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内,-|||-还原糖的量与棕红色物质的吸光度值成正比,利用比色法可定量测定样品中的含糖量。-|||-2.课前作业-|||-(1)能被氧化剂氧化的糖称为 __-|||-(2) __ 试剂和 __ 试剂中的 (a)^2+ 是一种弱氧化剂,能使还原糖氧化而本身被还-|||-原成红色的Cu2O沉淀,故可用于定性检测 __ .-|||-(3) __ 试剂由于较稳定且不易受其他物质干扰,临床上常用作尿糖的定性与半定量-|||-测试。-|||-四、实验内容和步骤-|||-1.实验用具、试剂和材料-|||-(1)用具 电热恒温水浴锅、分光光度计、电子天平、容量瓶、离心机、试管等。-|||-(2)试剂 葡萄糖标准溶液 (100mu g/mL) 、3,5-二 硝基水杨酸、蒸馏水等。-|||-(3)材料 马铃薯。-|||-2.实验步骤-|||-(1)还原糖的提取 准确称取1g马铃薯,用3mL蒸馏水研磨成匀浆,用30mL蒸馏水分-|||-次冲洗研钵,转移至试管中,50℃恒温水浴0.5h使还原糖浸出,将浸出液(含沉淀)转移到-|||-50mL离心管中 4000r/min 离心5min,沉淀可用20mL蒸馏水洗一次,再离心,将两次离心的-|||-上清液收集在100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。-|||-(2)葡萄糖标准曲线的制作及样品中还原糖测定 取8支试管,按下表方法配制一.系列不同-|||-浓度的葡萄糖溶液和待测溶液,并将测得的540nm处的吸光度值填写在相应位置。-|||-试 剂 1 2 3 4 5 () 样品1 样品2-|||-管编号-|||- . 能酷糖标准溶液 /mL 0 C.2 0,4 0.6 () 0.8 1, 0 () o-|||-0.6 () () 2.0 () 2.0-|||-0.8-|||-o-|||-得测液/mL-|||-0 o () 2.0-|||-o-|||-蒸馏水 (m) 2.0 () () () () () () ()-|||-5-二硝基水杨酸 /mL 1.5 1.5 1.5 () () () 1.5 1.5-|||-__-|||-匀后,澳水浴保温5min,净至室雷,分别用蒸馏水定容至25mL,在500m的正游览 __-|||-吸光度值 =40-|||-3.注意事项-|||-①标准曲线制作与样品还原糖含量测定应同时进行,一起显色和比色。-|||-②在540nm菠长下,用1号管作为参比管调零。-|||-五、思考题-|||-1.什么是还原糖?-|||-2.样品检测时,以谁为参比调零?