题目
样品在进行SDS-PAGE前须在沸水浴中加热10min,使其充分变性。()A. 对B. 错
样品在进行SDS-PAGE前须在沸水浴中加热10min,使其充分变性。()
A. 对
B. 错
题目解答
答案
B. 错
解析
本题考查SDS-PAGE实验中样品处理的关键步骤。核心在于理解变性时间和温度的合理性。SDS-PAGE通过变性使蛋白质完全展开,但过度加热会导致样品分解,因此需掌握正确的变性条件。题目中“加热10min”的描述不符合常规操作,需判断其正确性。
变性处理的作用与条件
- 变性目的:破坏蛋白质的非共价键和二硫键,使其成为单肽链,消除电荷差异,确保迁移率仅由分子量决定。
- SDS的作用:通过负电荷掩盖电荷差异,同时辅助变性。
- 常规条件:通常在95℃沸水浴中加热3-5分钟,或煮沸2分钟即可完成变性。若加热时间过长(如10分钟),可能导致蛋白质过度分解,影响电泳结果。
题目关键矛盾
题目要求加热10分钟,远超常规操作时间,属于过度变性,因此描述错误。