题目
2:请选择阴性对照也出现明显起飞的原因A. Mix或水被污染。B. 引物二聚体的出现。C. 如果使用了ROX校正,则可能是ROX的降解所造成。D. 模板量不足。
2:请选择阴性对照也出现明显起飞的原因
A. Mix或水被污染。
B. 引物二聚体的出现。
C. 如果使用了ROX校正,则可能是ROX的降解所造成。
D. 模板量不足。
题目解答
答案
ABC
A. Mix或水被污染。
B. 引物二聚体的出现。
C. 如果使用了ROX校正,则可能是ROX的降解所造成。
A. Mix或水被污染。
B. 引物二聚体的出现。
C. 如果使用了ROX校正,则可能是ROX的降解所造成。
解析
阴性对照出现明显扩增通常用于检测实验中的污染或非特异性扩增。本题需分析可能的原因,需结合PCR实验中各组分的作用及常见问题。关键点在于理解阴性对照的设计目的(排除污染、非特异性扩增等因素),并逐一分析选项中各因素是否会导致假阳性结果。
选项分析
A. Mix或水被污染
- 污染来源:若PCR试剂(如Mix、水)被外源DNA污染,阴性对照中会扩增出污染DNA,导致假阳性。这是阴性对照失效的常见原因。
B. 引物二聚体的出现
- 引物二聚体:在无模板情况下,引物可能因自身互补形成二聚体,并被Taq酶扩增,产生非特异性产物,导致阴性对照异常。
C. ROX校正降解
- ROX作用:ROX作为被动参考染料,用于校正孔间荧光差异。若ROX降解,荧光信号失衡,可能被误判为扩增信号,导致假阳性。
D. 模板量不足
- 无关性:阴性对照不含模板,模板量不足不会影响其结果,因此此选项不成立。