题目

影响盐析的主要因素有哪些？

题目解答

答案

（1）离子强度：Ks和beta;值，强度越大，蛋白质溶解度越小；（2）蛋白质的性质：因相对分子质量和立体结构而异，结构不对称、相对分子质量大的蛋白质易于盐析；（3）蛋白质的浓度：蛋白质浓度大，盐的用量小，共沉作用明显，分辨率低；蛋白质浓度小，盐的用量大，分辨率高；2.5%～3.0%时最适合；（4）pH值：通常调整到pI附近，盐浓度较大会对等电点产生较大影响，pH对不同蛋白质的共沉影响；（5）温度：低盐浓度下，温度升高蛋白质溶解度升高；高盐浓度下，温度升高，多数蛋白质和肽溶解度反而下降。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素是：无机盐的种类、浓度、温度和pH值。

解析

盐析是利用高浓度无机盐降低蛋白质溶解度，使其沉淀析出的过程。其核心在于破坏蛋白质表面的水化层并中和电荷。本题需掌握离子强度、蛋白质性质、浓度、pH值、温度五大关键因素，理解它们如何共同作用影响盐析效果。

（1）离子强度

盐析常数（Ks）和盐析强度（β值）：离子强度越大，蛋白质溶解度越小。不同盐类的Ks和β值不同，如硫酸铵Ks较低，适合温和盐析。
共沉作用：高离子强度可能非特异性沉淀杂质蛋白，降低分辨率。

（2）蛋白质性质

相对分子质量：大分子蛋白质更易盐析。
立体结构：结构不对称（如纤维状蛋白）比对称结构（如球状蛋白）更易析出。

（3）蛋白质浓度

高浓度：盐用量少，共沉杂质多，分辨率低。
低浓度：需更高盐浓度，分辨率高，但操作复杂。
最佳范围：2.5%～3.0%（指蛋白质浓度）。

（4）pH值

等电点（pI）：通常调整至pI附近，此时蛋白质溶解度最低。
盐浓度影响：高盐会改变蛋白质实际pI，需综合考虑盐和pH的平衡。

（5）温度

低盐：温度升高→溶解度增加。
高盐：温度升高→溶解度下降（因盐析主导作用增强）。