氰化高铁血红蛋白法:在溶血标本中,Hb中的Fe2^+被高铁氰化钾氧化为Fe3^+,Hb转化为Hi。Hi与KCN中的氰离子反应生成HiCN,在____处的吸光度与溶液中的浓度呈正比,根据测得吸光度可求得Hb的浓度。

本题考查氰化高铁血红蛋白法的原理及光谱分析知识。关键点在于理解反应产物HiCN的最大吸收波长。该方法通过比色分析确定血红蛋白浓度，而比色法的核心是物质在特定波长下的吸光度与浓度成正比。需回忆血红蛋白衍生物的光吸收特性，明确HiCN的特征吸收峰波长。

1. 反应过程：

   • Fe²+被高铁氰化钾氧化为Fe³+，Hb转化为高铁血红蛋白（Hi）。
   • Hi与KCN中的CN⁻结合生成HiCN，呈现樱桃红色。

2. 光吸收特性：

   • HiCN的形成使其对特定波长的光产生最大吸收。
   • 540nm（绿色光）是HiCN的最大吸收波长，此时吸光度与浓度严格遵循比尔-朗伯定律（A=εcl）。

3. 波长选择依据：

   • 540nm对应的互补色为红色，与HiCN的颜色一致，便于分光光度计检测。
   • 其他波长（如Hi的吸收峰505nm）不适用于本反应的定量分析。