题目
离子交换层是利用蛋白质的等电点不同进行分离的一种方法。( )答案:正确:2、名词释题(25分,每题5分)1. 活化能[中山大学2018研]答案:活化能是指分子从常态转变为容易发生化学反应的活跃状态所需要的最低能量。活化能的微小大小与反应速率相关,活化能越低,反应速率越快,因此降低活化能会有效地促进化学反应的进行。酶通过降低活化能来促进比较慢一些原本很慢的生化反应得以快速进行。:空2. 拓扑异构酶(topoisomerase)答案:拓扑异构酶(topoisomerase)是指通过切断DNA的一条或两条链中的磷酸二酯键,然后重新缠绕和封口来改变DNA连环数的酶。拓扑异构酶Ⅰ通过切断DNA中的一条链减少负超螺旋,增加一个连环数。某些拓扑异构酶Ⅱ也称为DNA促旋酶。:空3. 辅酶(coenzyme)答案:辅酶(coenzyme)是指那些与酶蛋白结合松散、使用透的方法就容易去除的有机小分子。许多维他命及其衍生物,如核黄素、硫胺素和叶酸,都属于辅酶。这些化合物无法由人体合成,必须通过饮食补充。不同的辅酶能够携带的化学基团也不同。:空4. 蛋白质的凝固作用答案:蛋白质的凝固作用是指蛋白质后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块,此凝块不易再溶于强酸和强碱中的现象。:空5. 沉降系数[暨南大学2019研]答案:沉降系数是指颗粒在单位离心力场中粒子移动的速度,以每单位离心力场的沉降速度表示,大多数蛋白质和核酸的沉降系数在4S和40S之间,核糖体及其亚基在30S和80S之间,多核糖体在100S以上。:空3、填空题(45分,每题5分)1. 激素作用具有的特异性与有关。答案:高度特异性的受体:2. 脂质具有以下三个特征、、。答案:不溶于水而溶于脂溶剂|为脂酸与醇所组成类似物的酯类及其衍生物|能被动物细胞所利用,作为构造组织、修补组织或供给能量之用:3. 给动物食用3H标记的,可使DNA带有放射性,而RNA不带放射性。答案:胸腺嘧啶:4. 对同一种酶来说,酶的比活力越,越高。答案:高|纯度:5. 胰岛素是胰岛β细胞分泌的,它是由前胰岛素原经专一性蛋白酶水,失去N端的成为。再经类胰蛋白酶和类羧肽酶的作用失去肽,形成具有生物活性的胰岛素。答案:信号|肽胰岛素原|C(连接):6. 酶的Km值与酶的有关,而与酶的无关。[暨南大学2019研]答案:性质|浓度:7. 激素与其受体结合有、、、和等特征。答案:高亲和性|特异性|可逆性|饱和性|产生强大的生物学效应:8. 胰蛋白酶专一地切断和的羧基端肽键。答案:Lys|Arg:9. 确定蛋白质中二硫键的位置,一般先采用,然后用技术分离水后的混合肽段。答案:蛋白水酶酶|对角线电泳:4、简答题(25分,每题5分)1. 简述根据氨基酸侧链结构的分类及特点。[上海交通大学2017研]答案: 20种蛋白质蛋白质差异在结构上的差别取决于侧链基团R的不同。通常根据R基团的化学结构或性质将20种氨基酸成功进行分类: (1)根据侧链基团极性 ①非极性氨基酸(疏水氨基酸):8种 丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和蛋氨酸(Met)。 ②极性氨基酸(亲水氨基酸): a.极性不带电荷:7种 甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、天冬酰胺(Asn)和谷氨酰胺(Gln)。 b.极性带正电荷的氨基酸(碱性氨基酸):3种 赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)和组氨酸(His)。 c.极性带负电荷的氨基酸(酸性氨基酸):2种 天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)。 (2)根据化学结构 ①脂肪族氨基酸:丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。 ②芳香族氨基酸:苯丙氨酸和酪氨酸。 ③杂环族氨基酸:组氨酸和色氨酸。 ④杂环亚氨基酸:脯氨酸。:空2. 根据结构与催化机制(而不是根据被驱动的离子类型),说出三类驱动离子的ATP酶名称。答案:三类驱动离子的ATP酶,即P型泵、F型泵和V型泵。它们的基本要素基本功能是通过水ATP提供服务的能量转运离子,或是通过离子梯度前体ATP。P型泵或P型ATPase,运输之时需要磷酸化,包括Na+K+泵,Ca+泵;V型泵或V型ATPase,主要位于小泡的膜上所,如溶酶体膜中的H+泵,运输时需ATP供能,但不需要磷酸化;F型泵或F型ATPase,这种泵主要存在于细菌质膜、线粒体膜和叶绿体膜中,它们在能量转换中起重要作用,是氧化磷酸化或光合磷酸化偶联因子。F泵工作时不消耗ATP,而是将ADP转化成ATP,但是它们在很强一定条件下也会具有ATPase活性。:空3. 用眼较多的学生、长期在电脑前工作的人群等需要补充维生素A,请释其原理。答案:维生素A(视黄醇)在体内可被氧化成视黄醛,后者与视蛋白结合形成视紫红质,这是眼球上的两种感光细胞之一:杆细胞中的感光基质。视紫红质在光中分,在暗中再合成,构成循环。在循环过程中视黄醛有损失,需要从视黄醇(维生素A)得到补充。所以用眼较多的人群需要补充维生素A。:空4. 蛋白质分离纯化。 (1)举例一种蛋白质沉淀技术说明其原理。 (2)举例两种层技术说明其原理。 (3)测蛋白质浓度的方法。 (4)测蛋白质纯度的方法。[北京师范大学2018研]答案: (1)一种脂质沉淀技术 有机溶剂沉淀法。其原理是减少水的介电常数,导致具有表面水层的生物大分子脱水,相互聚集,最后出。 (2)两种层技术及其原理 ①分配层分离核心技术。其原理是利用各物质的不同分配系数,使混合物随流动相通过固定相时而予以分离。 ②聚酰胺薄膜层技术。其原理是相混合物高密度相通过聚酰胺薄膜时,由于聚酰胺与各极性分子产生氢键吸附能力的氢原子强弱不同,而将混合物分离。 (3)测蛋白质分压的方法 考马斯亮蓝法,是利用蛋白质活性炭结合的原理,定量测定微量核酸浓度快速灵敏的方法。 (4)测糖类纯度的方法 ①电泳法是蛋白质纯度鉴定最的方法。如果结构分化学分在凝胶电泳上显示一条区带,说明样品在其质荷比方面是均一的,可作为纯度司法鉴定的一个指标。 ②免疫化学法:免疫扩散、免疫电泳、双向免疫电泳和放射免疫分等都是鉴定蛋白质纯度的有效方法。:空5. 某一肽经酸水组成分为5种氨基酸,该肽的N端非常容易环化。经溴化氰处理后得一游离碱性氨基酸,Pauly反应阳性。若用胰蛋白酶作用则得两个肽段:其一为坂口反应阳性,另一个在280nm有强的光吸收,并呈Millon氏阳性反应。求此肽的氨基酸排列顺序,并指出它的等电点应该是大于、等于或小于7?答案: 根据题意: (1)N端非常容易环化,说明此肽的N端是Gln。 (2)经溴化氰处理后得一游离碱性氨基酸,Pauly反应呈阳性,说明此氨基酸是His,并且His位于Met之后,即为MetHis。 (3)用胰蛋白酶水得两个肽段:其一为坂口反应阳性,说明含Arg,另一个在280nm有强的光吸收且呈Millon氏阳性反应,说明含Tyr。根据谷胱甘肽的专一性,可知该肽含…ArgTyr…。 (4)此肽共含5种氨基酸。 由(1)(2)(3)(4)可推出此肽多肽的率先推出顺序为GlnArgTyrMetHis因为此肽是一个氨肽,所以其pI应该大于7。:空5、计算题(5分,每题5分)1. 过氧化氢酶的Km值为2.5×10-2molL,当底物过氧化氢的浓度为100mmolL时,求在此浓度下,过氧化氢酶被底物所饱和的百分数。答案: 所谓酶被底物饱和的百分比即是简而言之反应速度与最大反应速度的百分比。根据米氏方程知::空6、论述题(5分,每题5分)1. 大肠杆菌含有2000种以上的蛋白质,为了分离它所表达的一个外源基因的产物并保持它的活性,常有很大困难。但为了某种目的,请根据下列要求写出具体的方法。 (1)利用溶度差别进行分离。 (2)利用蛋白质分子大小进行分离。 (3)根据不同电荷进行分离。 (4)已制备有该产物的抗体进行分离。 (5)产物的浓缩。 (6)产物纯度的鉴定。答案: 首先要有一种方法或几类检测或鉴定外源基因表达产物的方法,然后,在每一次分离纯化后,诠释检测表达产物隐含哪一个级分中。 (1)用硫酸铵或安非他命分级沉淀,可根据蛋白质的溶度的差别进行分离。 (2)SDSPAGE、凝胶过滤、超离心,以及超滤可对分子量不同的蛋白质进行分离。 (3)对带电行为不同的蛋白质可以用离子交换层、等电聚焦、圆盘电泳、毛细管电泳等方法通过分离;但是在使用这一类型的方法时选择溶液的pH至关重要,因为蛋白质的带电不法行为和溶液的pH密切相关。 (4)如果具有表达产物的抗体,则可以使用免疫沉淀或亲和层的方法简洁地分离所需要的表达产物。 (5)使用吸附量较大的离子交换层和亲和层,以及对饱和外科手术硫酸铵或聚乙二醇反透,还有冷冻干燥等方法都可以达到样品的目的,然而这些方法使用前一天,都存在着氧化物脱盐或除去小分子化合物的问题。相比而言,所用合适截留分子量合适的超滤膜,进行超过滤,往往能同时达到浓缩样品和好好盐(包括小分子)的目的。 (6)上述的(2)和(3)这两大类用于分离纯化产物的过程,实际上也是有样品纯度鉴定的作用。此外,末端分、质谱和反相的HPLC层也都是如何有效的样品层纯度鉴定的方法。但是应注意,样品的纯度是一个相对的概念。:空7、选择题(13分,每题1分)1. 酶的纯粹竞争性抑制剂具有下列哪种动力学效应?( )A. Vmax增大,Km不变B. Vmax减小,Km不变C. Vmax不变,Km减小D. Vmax不变,Km增大答案:D:2. 酶的活性中心是指( )。[中农业大学2017研]A. 酶分子结合底物并发挥催化作用的关键性三维结构区B. 酶分子与底物的结合部位C. 酶分子中心部位的一种特性结构D. 酶分子上的几个必须基团答案:A:酶分子中直接与底物结合,并和酶催化作用直接有关的区域称为酶的活性中心或活性部位。3. 肠道细菌可以合成下列哪种维生素?( )A. 维生素DB. 维生素CC. 维生素ED. 维生素A
离子交换层是利用蛋白质的等电点不同进行分离的一种方法。( )答案:正确:2、名词释题(25分,每题5分)1. 活化能[中山大学2018研]答案:活化能是指分子从常态转变为容易发生化学反应的活跃状态所需要的最低能量。活化能的微小大小与反应速率相关,活化能越低,反应速率越快,因此降低活化能会有效地促进化学反应的进行。酶通过降低活化能来促进比较慢一些原本很慢的生化反应得以快速进行。:空2. 拓扑异构酶(topoisomerase)答案:拓扑异构酶(topoisomerase)是指通过切断DNA的一条或两条链中的磷酸二酯键,然后重新缠绕和封口来改变DNA连环数的酶。拓扑异构酶Ⅰ通过切断DNA中的一条链减少负超螺旋,增加一个连环数。某些拓扑异构酶Ⅱ也称为DNA促旋酶。:空3. 辅酶(coenzyme)答案:辅酶(coenzyme)是指那些与酶蛋白结合松散、使用透的方法就容易去除的有机小分子。许多维他命及其衍生物,如核黄素、硫胺素和叶酸,都属于辅酶。这些化合物无法由人体合成,必须通过饮食补充。不同的辅酶能够携带的化学基团也不同。:空4. 蛋白质的凝固作用答案:蛋白质的凝固作用是指蛋白质后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块,此凝块不易再溶于强酸和强碱中的现象。:空5. 沉降系数[暨南大学2019研]答案:沉降系数是指颗粒在单位离心力场中粒子移动的速度,以每单位离心力场的沉降速度表示,大多数蛋白质和核酸的沉降系数在4S和40S之间,核糖体及其亚基在30S和80S之间,多核糖体在100S以上。:空3、填空题(45分,每题5分)1. 激素作用具有的特异性与有关。答案:高度特异性的受体:2. 脂质具有以下三个特征、、。答案:不溶于水而溶于脂溶剂|为脂酸与醇所组成类似物的酯类及其衍生物|能被动物细胞所利用,作为构造组织、修补组织或供给能量之用:3. 给动物食用3H标记的,可使DNA带有放射性,而RNA不带放射性。答案:胸腺嘧啶:4. 对同一种酶来说,酶的比活力越,越高。答案:高|纯度:5. 胰岛素是胰岛β细胞分泌的,它是由前胰岛素原经专一性蛋白酶水,失去N端的成为。再经类胰蛋白酶和类羧肽酶的作用失去肽,形成具有生物活性的胰岛素。答案:信号|肽胰岛素原|C(连接):6. 酶的Km值与酶的有关,而与酶的无关。[暨南大学2019研]答案:性质|浓度:7. 激素与其受体结合有、、、和等特征。答案:高亲和性|特异性|可逆性|饱和性|产生强大的生物学效应:8. 胰蛋白酶专一地切断和的羧基端肽键。答案:Lys|Arg:9. 确定蛋白质中二硫键的位置,一般先采用,然后用技术分离水后的混合肽段。答案:蛋白水酶酶|对角线电泳:4、简答题(25分,每题5分)1. 简述根据氨基酸侧链结构的分类及特点。[上海交通大学2017研]答案: 20种蛋白质蛋白质差异在结构上的差别取决于侧链基团R的不同。通常根据R基团的化学结构或性质将20种氨基酸成功进行分类: (1)根据侧链基团极性 ①非极性氨基酸(疏水氨基酸):8种 丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和蛋氨酸(Met)。 ②极性氨基酸(亲水氨基酸): a.极性不带电荷:7种 甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、天冬酰胺(Asn)和谷氨酰胺(Gln)。 b.极性带正电荷的氨基酸(碱性氨基酸):3种 赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)和组氨酸(His)。 c.极性带负电荷的氨基酸(酸性氨基酸):2种 天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)。 (2)根据化学结构 ①脂肪族氨基酸:丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。 ②芳香族氨基酸:苯丙氨酸和酪氨酸。 ③杂环族氨基酸:组氨酸和色氨酸。 ④杂环亚氨基酸:脯氨酸。:空2. 根据结构与催化机制(而不是根据被驱动的离子类型),说出三类驱动离子的ATP酶名称。答案:三类驱动离子的ATP酶,即P型泵、F型泵和V型泵。它们的基本要素基本功能是通过水ATP提供服务的能量转运离子,或是通过离子梯度前体ATP。P型泵或P型ATPase,运输之时需要磷酸化,包括Na+K+泵,Ca+泵;V型泵或V型ATPase,主要位于小泡的膜上所,如溶酶体膜中的H+泵,运输时需ATP供能,但不需要磷酸化;F型泵或F型ATPase,这种泵主要存在于细菌质膜、线粒体膜和叶绿体膜中,它们在能量转换中起重要作用,是氧化磷酸化或光合磷酸化偶联因子。F泵工作时不消耗ATP,而是将ADP转化成ATP,但是它们在很强一定条件下也会具有ATPase活性。:空3. 用眼较多的学生、长期在电脑前工作的人群等需要补充维生素A,请释其原理。答案:维生素A(视黄醇)在体内可被氧化成视黄醛,后者与视蛋白结合形成视紫红质,这是眼球上的两种感光细胞之一:杆细胞中的感光基质。视紫红质在光中分,在暗中再合成,构成循环。在循环过程中视黄醛有损失,需要从视黄醇(维生素A)得到补充。所以用眼较多的人群需要补充维生素A。:空4. 蛋白质分离纯化。 (1)举例一种蛋白质沉淀技术说明其原理。 (2)举例两种层技术说明其原理。 (3)测蛋白质浓度的方法。 (4)测蛋白质纯度的方法。[北京师范大学2018研]答案: (1)一种脂质沉淀技术 有机溶剂沉淀法。其原理是减少水的介电常数,导致具有表面水层的生物大分子脱水,相互聚集,最后出。 (2)两种层技术及其原理 ①分配层分离核心技术。其原理是利用各物质的不同分配系数,使混合物随流动相通过固定相时而予以分离。 ②聚酰胺薄膜层技术。其原理是相混合物高密度相通过聚酰胺薄膜时,由于聚酰胺与各极性分子产生氢键吸附能力的氢原子强弱不同,而将混合物分离。 (3)测蛋白质分压的方法 考马斯亮蓝法,是利用蛋白质活性炭结合的原理,定量测定微量核酸浓度快速灵敏的方法。 (4)测糖类纯度的方法 ①电泳法是蛋白质纯度鉴定最的方法。如果结构分化学分在凝胶电泳上显示一条区带,说明样品在其质荷比方面是均一的,可作为纯度司法鉴定的一个指标。 ②免疫化学法:免疫扩散、免疫电泳、双向免疫电泳和放射免疫分等都是鉴定蛋白质纯度的有效方法。:空5. 某一肽经酸水组成分为5种氨基酸,该肽的N端非常容易环化。经溴化氰处理后得一游离碱性氨基酸,Pauly反应阳性。若用胰蛋白酶作用则得两个肽段:其一为坂口反应阳性,另一个在280nm有强的光吸收,并呈Millon氏阳性反应。求此肽的氨基酸排列顺序,并指出它的等电点应该是大于、等于或小于7?答案: 根据题意: (1)N端非常容易环化,说明此肽的N端是Gln。 (2)经溴化氰处理后得一游离碱性氨基酸,Pauly反应呈阳性,说明此氨基酸是His,并且His位于Met之后,即为MetHis。 (3)用胰蛋白酶水得两个肽段:其一为坂口反应阳性,说明含Arg,另一个在280nm有强的光吸收且呈Millon氏阳性反应,说明含Tyr。根据谷胱甘肽的专一性,可知该肽含…ArgTyr…。 (4)此肽共含5种氨基酸。 由(1)(2)(3)(4)可推出此肽多肽的率先推出顺序为GlnArgTyrMetHis因为此肽是一个氨肽,所以其pI应该大于7。:空5、计算题(5分,每题5分)1. 过氧化氢酶的Km值为2.5×10-2molL,当底物过氧化氢的浓度为100mmolL时,求在此浓度下,过氧化氢酶被底物所饱和的百分数。答案: 所谓酶被底物饱和的百分比即是简而言之反应速度与最大反应速度的百分比。根据米氏方程知::空6、论述题(5分,每题5分)1. 大肠杆菌含有2000种以上的蛋白质,为了分离它所表达的一个外源基因的产物并保持它的活性,常有很大困难。但为了某种目的,请根据下列要求写出具体的方法。 (1)利用溶度差别进行分离。 (2)利用蛋白质分子大小进行分离。 (3)根据不同电荷进行分离。 (4)已制备有该产物的抗体进行分离。 (5)产物的浓缩。 (6)产物纯度的鉴定。答案: 首先要有一种方法或几类检测或鉴定外源基因表达产物的方法,然后,在每一次分离纯化后,诠释检测表达产物隐含哪一个级分中。 (1)用硫酸铵或安非他命分级沉淀,可根据蛋白质的溶度的差别进行分离。 (2)SDSPAGE、凝胶过滤、超离心,以及超滤可对分子量不同的蛋白质进行分离。 (3)对带电行为不同的蛋白质可以用离子交换层、等电聚焦、圆盘电泳、毛细管电泳等方法通过分离;但是在使用这一类型的方法时选择溶液的pH至关重要,因为蛋白质的带电不法行为和溶液的pH密切相关。 (4)如果具有表达产物的抗体,则可以使用免疫沉淀或亲和层的方法简洁地分离所需要的表达产物。 (5)使用吸附量较大的离子交换层和亲和层,以及对饱和外科手术硫酸铵或聚乙二醇反透,还有冷冻干燥等方法都可以达到样品的目的,然而这些方法使用前一天,都存在着氧化物脱盐或除去小分子化合物的问题。相比而言,所用合适截留分子量合适的超滤膜,进行超过滤,往往能同时达到浓缩样品和好好盐(包括小分子)的目的。 (6)上述的(2)和(3)这两大类用于分离纯化产物的过程,实际上也是有样品纯度鉴定的作用。此外,末端分、质谱和反相的HPLC层也都是如何有效的样品层纯度鉴定的方法。但是应注意,样品的纯度是一个相对的概念。:空7、选择题(13分,每题1分)1. 酶的纯粹竞争性抑制剂具有下列哪种动力学效应?( )A. Vmax增大,Km不变B. Vmax减小,Km不变C. Vmax不变,Km减小D. Vmax不变,Km增大答案:D:2. 酶的活性中心是指( )。[中农业大学2017研]A. 酶分子结合底物并发挥催化作用的关键性三维结构区B. 酶分子与底物的结合部位C. 酶分子中心部位的一种特性结构D. 酶分子上的几个必须基团答案:A:酶分子中直接与底物结合,并和酶催化作用直接有关的区域称为酶的活性中心或活性部位。3. 肠道细菌可以合成下列哪种维生素?( )A. 维生素DB. 维生素CC. 维生素ED. 维生素A
题目解答
答案
已知某种酶的Km值为25mmolL,欲使酶促反应达到最大反应速度的50,该底物浓度为( )。A. 25mmolLB. 12.5mmolLC. 37.5mmolLD. 50mmolL答案:A:
解析
本次题目涵盖了生物化学多个知识点，包括判断题、名词解释、填空题、简答题、计算题和选择题，主要考察对生物化学基础概念、物质结构与功能、酶学、蛋白质分离纯化等内容的掌握。
判断题
离子交换层析利用蛋白质等电点差异分离，原理正确。
名词解释
- 活化能：分子从常态转为活跃反应状态所需的最低能量，酶通过降低活化能加速反应。
- 拓扑异构酶：切断DNA磷酸二酯键并重新连接以改变连环数的酶，分为Ⅰ型（切单链）和Ⅱ型（切双链）。
- 辅酶：与酶蛋白结合松散的有机小分子，多为维生素衍生物，参与基团转移。
- 蛋白质凝固作用：蛋白质变性后絮状物加热形成坚固凝块，不溶于强酸强碱的现象。
- 沉降系数：颗粒在单位离心力场中的沉降速度，用于表征生物大分子大小。
填空题
- 激素作用特异性与高度特异性的受体有关。
- 脂质特征：不溶于水而溶于脂溶剂；为脂酸与醇的酯类及其衍生物；能被细胞利用作结构或能量。
- 标记胸腺嘧啶可使DNA带放射性（RNA无）。
- 酶比活力越高，纯度越高。
- 胰岛素由前胰岛素原失去N端信号肽成胰岛素原，再失去C（连接）肽形成活性胰岛素。
- 酶的Km与性质有关，与浓度无关。
- 激素受体结合特征：高亲和性、特异性、可逆性、饱和性、强大生物学效应。
- 胰蛋白酶切Lys、Arg的羧基端肽键。
- 确定二硫键位置：先蛋白酶水解，再用对角线电泳分离肽段。
简答题
- 氨基酸分类：按侧链极性分非极性（8种）、极性不带电荷（7种）、碱性（3种）、酸性（2种）；按结构分脂肪族、芳香族、杂环族、杂环亚氨基酸（脯氨酸）。
- 离子驱动ATP酶：P型泵（需磷酸化，如Na⁺-K⁺泵）、V型泵（溶酶体H⁺泵，需ATP不磷酸化）、F型泵（线粒体/叶绿体ATP合成，可逆）。
- 维生素A与视力：维生素A氧化为视黄醛，与视蛋白结合成视紫红质（杆细胞感光物质），视紫红质循环中视黄醛消耗需维生素A补充。
- 蛋白质分离纯化：
- 沉淀：有机溶剂沉淀（减少介电常数使蛋白质脱水聚集）。
- 层析：分配层析（分配系数差异）、聚酰胺薄膜层析（氢键吸附差异）。
- 浓度测定：考马斯亮蓝法（蛋白质结合染料显色）。
- 纯度鉴定：电泳（单一条带）、免疫化学法（抗原-抗体反应）。
- 肽序列与等电点：
- N端易环化→Gln；溴化氰得游离His（Pauly反应阳性）→Met-His；胰蛋白酶得坂口反应阳性（Arg）和280nm吸收（Tyr）+Millon阳性（Tyr）→Arg-Tyr；5种氨基酸→序列Gln-Arg-Tyr-Met-His。
- 含碱性氨基酸（Arg、His）多于酸性，等电点>7。
计算题
根据米氏方程 $v = V_{\text{max}} \cdot [S]/(K_m + [S])$，当 $v = 0.5V_{\text{max}}$ 时，$[S] = K_m$。已知 $K_m = 25\,\text{mmol/L}$，故底物浓度为25mmol/L。
论述题
- 溶度差异：硫酸铵分级沉淀。
- 分子大小：SDS-PAGE、凝胶过滤、超滤。
- 电荷差异：离子交换层析、等电聚焦、电泳。
- 抗体分离：免疫沉淀、亲和层析。
- 浓缩：超滤、冻干、聚乙二醇沉淀。
- 纯度鉴定：电泳、质谱、HPLC、末端分析。
选择题
- D：竞争性抑制剂使Km增大，Vmax不变。
- A：酶活性中心是结合底物并催化的关键三维结构区。
- D：肠道细菌合成维生素K（题目可能笔误，选项中D为维生素E，应为维生素K，但根据选项选D）。
- A：当 $v = 0.5V_{\text{max}}$ 时，$[S] = K_m = 25\,\text{mmol/L}$。